基于镉特异性功能化核酸适配体测定痕量镉的共振光散射新方法

镉特异性功能化核酸适配体(FA_(Cd))在无镉体系中能阻碍金纳米(GNPs)与罗丹明6G(Rh6G)聚集,体系共振光散射强度较低。当体系中存在镉离子时,FACd与之特异性结合,从RNA位点处断裂产生适配体片段(FAF),FAF与GNPs和Rh6G形成GNPs-FAF-Rh6G聚合物,共振光散射强度大幅增加,共振光散射强度值(I_(RLS))与镉的浓度(cCd⁽²⁺⁾)在0.28(2+))在0.28¹1.2 ng/mL范围内呈现良好线性关系,检出限为0.04 ng/mL,相对标准偏差≤5%,加标回收率为96.4%11.2 ng/mL范围内呈现良好线性关系,检出限为0.04 ng/mL,相对标准偏差≤5%,加标回收率为96.4%¹01.4%。     

基于高通量筛选的双特异性抗体纯化方法开发

双特异性抗体（BsAbs）,简称双抗,是一种能同时结合两个不同靶点或表位的抗体,BsAbs在表达过程中通常伴随产生多种副产物,在纯化工艺中很难被去除。本研究运用高通量筛选技术,通过对SP Sepharose Fast Flow填料的纯化条件进行探索,建立基于Sepharose Fast Flow填料的双特异性抗体纯化方法开发的通用流程,每个筛选条件只需要0.4 mg双抗样品,可同时筛选多达32个条件,筛选过程总耗时2 h,而传统柱层析需耗时64 h。通过高通量迅速筛选方法可以有效去除双抗分子副产物,为解决纯化工艺难题提供了一种新的工艺路线。     

液液萃取-超高效液相色谱-串联质谱测定人体血浆中的百草枯残留

[目的]百草枯使用量大、毒性强,人们因意外或自杀摄入而中毒死亡的风险大。了解百草枯中毒后的血药浓度,对病人拯救和预后至关重要。[方法]建立了超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱快速测定人体血浆中百草枯残留的方法。样品先经乙腈萃取、沉淀蛋白后,以硅烷醇基完全裸露的BEH HILIC色谱柱为分离柱、经电喷雾正离子源离子化、多反应监测,添加回收标准曲线外标法定量。[结果]在0.05～4.00 mg/L范围内,百草枯的质量浓度与对应的色谱峰面积间呈良好的线性关系,相关系数为0.9989,检出限为0.01 mg/L,定量限为0.03 mg/L,在0.03～2.00 mg/L的添加水平下,百草枯的回收率在71.5%～95.1%之间;相对标准偏差在4.8%～9.1%之间。[结论]该方法通过HILIC柱硅烷醇基对百草枯的特异性作用,解决了UPLC-MS法建立中"百草枯柱效提升"和"仪器污染"的矛盾问题,具有分析时间短、准确度好、灵敏度高等优点,适用于人体血浆中百草枯残留测定。     

黄曲霉产β-1,4-木聚糖酶发酵条件的优化及其酶学特性

研究发现一株高产β-1,4-木聚糖酶的黄曲霉,拟优化其产酶条件并分析该酶的酶学特性。采用单因素法优化其摇瓶发酵条件,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结合酶谱法判定酶的特性以及薄层色谱分析法(TLC)判定酶的水解特异性。结果表明,产酶最佳培养基为:麸皮3.5%、磷酸氢二铵3.0%、吐温-60 1.0%、NaCl 0.5%、MgSO₄·7H₂O 0.05%和KH₂PO₄ 0.075%;黄曲霉在35 ℃下培养5 d达到最高酶活力115.08 U/mL,为未优化时的9.4倍。该菌能分泌两种β-1,4-木聚糖酶,分子量约为20.1和31.0 kDa,均不同于已有报道。粗酶的最适pH和最适温度分别为MOPS 7.5和55 ℃,在pH5.5~9.0及30~50 ℃范围内能保持酶活力的稳定。该酶不仅能水解榉木木聚糖产生低聚木糖,还能微弱降解大麦葡聚糖,有助于它在木质纤维素降解领域中的应用。     

重组氨肽酶底物特异性及协同水解玉米蛋白质

以9种不同的氨基酸-对硝基苯胺为底物,考察重组枯草芽孢杆菌氨肽酶对底物的特异性。结果显示,该氨肽酶对由疏水氨基酸组成的Leu-pNA水解活力最强,其次是两种由碱性氨基酸组成的Arg-pNA、Lys-pNA,对其它几种由疏水氨基酸组成的Ala-pNA、Ile-pNA、Val-pNA、Phe-pNA、Pro-pNA表现出较弱的水解活力,而对酸性氨基酸组成的Glu-pNA则无水解活力。在此基础上考察其与内切蛋白酶协同水解玉米蛋白质的效果,以水解度为指标进行单因素试验,明确氨肽酶与碱性蛋白酶复配水解玉米蛋白质的效果较佳。双酶水解产物中新增游离氨基酸含量分别为碱性蛋白酶和氨肽酶单独水解的4.89倍、6.05倍;水解产物中多肽相对分子质量多在1 000 Da以下,其中500~1 000 Da的寡肽占14.57%,180~500 Da的小肽质量分数为68.42%,水解度达65%。这些结果表明,氨肽酶和碱性蛋白酶协同水解蛋白质原料具有良好的应用前景。     

沙门菌属特异性检测靶点碱基差异位点的识别及其血清型决定力

以美国国家生物技术信息中心(NCBI)已公布的28株沙门菌(14个血清型)全基因组序列为研究对象,对前期研究获得的7个沙门菌属特异性检测靶点在不同血清型间的单核苷酸多态性进行比较分析,结果表明,S9和S69为碱基差异位点最多的两个靶点,具有沙门菌分子血清分型的潜在能力。随后,通过分析S9和S69在沙门菌不同血清型菌株中的差异位点,分别绘制两个血清分型靶点的差异位点表,从而获得了这两个靶点同时用于14个沙门菌血清型的快速分子血清分型的差异位点组合。在这些组合中,同一血清型具有相同的差异位点,不同血清型可以通过差异位点得以区分。最后,采集食品样品192份,用国标方法获得疑似沙门菌21株;利用血清分子分型靶点S9和S69进行快速分型,并同时用传统玻片凝集反应鉴定方法进行验证,两种方法鉴定结果的符合率为100%。鉴定结果为:21株沙门菌共包括4个不同血清型,其中肠炎沙门菌10株、鼠伤寒沙门菌7株、鸡沙门菌2株、纽波特沙门菌2株。基因组序列分析结果和分离株分型结果均表明,沙门菌特异分子检测靶点S9和S69相结合具备沙门菌的分子血清分型能力,以差异位点表为基础建立的血清分型方法有望替代传统的玻片凝集血清分型这一繁杂步骤,从而降低沙门菌血清鉴定的时间与成本,为聚合酶链式反应技术应用于沙门菌分子血清分型提供新思路。     

应用PCR快速检测食品中沙门氏杆菌方法的研究

本研究利用沙门氏杆菌属特异的inv A基因序列，设计一对特异性的引物，通过PCR反应来检测多种样品中的沙门氏杆菌；反应的特异性和敏感性以及反应的最适条件等试验的结果显示：此PCR方法检测沙门氏菌属的特异性为100％：样品中活菌的检测限为1．43CFU／10g：反应的最佳退火温度是65℃；最适模板浓度范围在10^4～10^8copies／ml。本方法与传统的沙门氏杆菌检测方法以及最近报道的相关方法比较，具有简单、快速、特异性好和敏感性高、经济等特点，并可满足大批样品沙门氏杆菌筛选检测的要求。     

转基因棉花MON88913转化体特异性定性、定量PCR检测方法

本文以我国批准商业化的转基因耐草甘膦棉花MON88913为研究对象,建立并验证了其转化体特异性定性、定量PCR检测方法.建立的定性PCR方法的检测极限是20个拷贝棉花单倍体基因组DNA,定量PCR方法的检测和定量极限分别是10和20个拷贝棉花单倍体基因组DNA.同时,我们组织了实验室5位研究人员对建立的定量PCR检测方法进行了协同验证.对5个盲样的定量分析结果显示与真实值的偏差介于1.59% 和10.12%之间,完全满足国际标准25%偏差范围的要求,完全可用于转基因棉花MON88913的实际样品检测.