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91.
为了建立一种用于检测动物源性食品中呋喃它酮代谢物(AMOZ)的可视化免疫亲和凝胶柱检测方法,利用对醛基苯甲酸(CPA)对AMOZ进行衍生处理得到衍生物CPAMOZ,制备CPAMOZ完全抗原,并通过免疫小鼠获取CPAMOZ多克隆抗体,使用间接ELISA法对抗体的效价及特异性进行测定。实验采用恒温振荡法将溴化氰活化的琼脂糖凝胶分别与CPAMOZ抗体、HRP抗体偶联制得CPAMOZ抗体胶和HRP抗体胶,作为亲和凝胶柱的检测层与质控层。建立AMOZ可视化免疫亲和凝胶柱分析方法,确定了该方法在酶标抗原的稀释倍数为5000、HRP胶稀释20倍、CPAMOZ抗体胶稀释15倍的条件下,达到最佳工作状态。实验结果表明CPAMOZ多克隆抗体效价为1:64000,IC_(50)值为2.19μg/L,具有良好的灵敏度及特异性。建立的AMOZ可视化免疫亲和凝胶检测柱方法检测限为4μg/L,动物源实际样品中AMOZ的检测限为2μg/kg。该方法快速便捷,符合我国高通量筛选食品中AMOZ的要求。 相似文献
92.
以美国国家生物技术信息中心(NCBI)已公布的28株沙门菌(14个血清型)全基因组序列为研究对象,对前期研究获得的7个沙门菌属特异性检测靶点在不同血清型间的单核苷酸多态性进行比较分析,结果表明,S9和S69为碱基差异位点最多的两个靶点,具有沙门菌分子血清分型的潜在能力。随后,通过分析S9和S69在沙门菌不同血清型菌株中的差异位点,分别绘制两个血清分型靶点的差异位点表,从而获得了这两个靶点同时用于14个沙门菌血清型的快速分子血清分型的差异位点组合。在这些组合中,同一血清型具有相同的差异位点,不同血清型可以通过差异位点得以区分。最后,采集食品样品192份,用国标方法获得疑似沙门菌21株;利用血清分子分型靶点S9和S69进行快速分型,并同时用传统玻片凝集反应鉴定方法进行验证,两种方法鉴定结果的符合率为100%。鉴定结果为:21株沙门菌共包括4个不同血清型,其中肠炎沙门菌10株、鼠伤寒沙门菌7株、鸡沙门菌2株、纽波特沙门菌2株。基因组序列分析结果和分离株分型结果均表明,沙门菌特异分子检测靶点S9和S69相结合具备沙门菌的分子血清分型能力,以差异位点表为基础建立的血清分型方法有望替代传统的玻片凝集血清分型这一繁杂步骤,从而降低沙门菌血清鉴定的时间与成本,为聚合酶链式反应技术应用于沙门菌分子血清分型提供新思路。 相似文献
93.
目的:研究植物雌激素染料木黄酮(GEN)抑制AKR1C3的表达,进而抑制去势抵抗前列腺癌(CRPC)的生长,为染料木黄酮临床治疗CRPC提供理论依据。方法:在无激素的血清环境下培养22RV1、VCaP、RWPE-1细胞,以不同浓度(0、12.5、25、50、100 μmol/L)的GEN处理48 h。利用CCK-8检测细胞增殖活性。通过AKR1C3 siRNA、AKR1C3抑制剂(ASP-9521)分别与GEN联合干扰22RV1、VCaP细胞,用Western blot检测细胞中PSA及AKR1C3蛋白的表达水平。结果:染料木黄酮能抑制去势抵抗前列腺癌的生长。Western blot结果显示,GEN能够抑制PSA、AKR1C3蛋白的表达,且与AKR1C3 siRNA、AKR1C3抑制剂(ASP-9521)联合作用时,对AKR1C3的抑制效果更为显著。结论:染料木黄酮可能通过抑制去势抵抗前列腺癌细胞中AKR1C3的表达,进而抑制CRPC细胞的增殖。 相似文献
94.
比较筛选基于聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)技术的马源性成分鉴定方法中高灵敏度和特异性引物。方法 选取来自国标法、专利和文献报道的3组马源性成分鉴定引物, 比较其灵敏度和特异性, 筛选高灵敏度和特异性引物。结果 3组引物的灵敏度和特异性存在差异, 以线粒体DNA为靶标的Ⅱ组马源性成分鉴定引物的特异性和灵敏度优于分别以线粒体和核基因组DNA为靶标的马驴通用鉴定引物, 检出最低限度均满足检测需求。结论 通过比较马源性成分鉴定的3组PCR引物, 以线粒体DNA为靶标的Ⅱ组马源性成分特异性鉴定引物可作为马成分鉴定的首选, 线粒体和核基因组靶标联合可提高马成分鉴定的准确性并可用于杂交种鉴定, 为马源性成分及产制品鉴定提供了一定基础。 相似文献
95.
96.
97.
目的:寻找简易且重复性高的分子标记方法对保健食品铁皮石斛及其混淆品进行分子鉴别并对其亲缘关系进行分析。方法:对铁皮石斛及其混淆品的matK 基因进行扩增、测序并进行序列分析,寻找其中存在的单核苷酸多态性(SNP)位点并根据SNP 位点设计特异性鉴别引物;运用Mega 3.0 等软件进行遗传关系分析。结果:根据matK 基因序列中存在的SNP 位点及特异性鉴别引物,可将铁皮石斛与其混淆品成功分开;各样品之间存在较大的遗传差异。结论:SNP 位点及特异性鉴别引物可对保健食品铁皮石斛及其混淆品进行快速、简便的鉴别,通过matK 基因可以分析正品与混淆品之间的亲缘关系。 相似文献
98.
99.
为建立多重PCR-液相芯片检测13个品系的转基因玉米的方法,针对BT11,BT176,Mon810,Mon863,T25,GA21,NK603,TC1507,Mon89034,Mir162,Mon88017,MIR604和BVLA430101这13种玉米品系的侧翼序列,设计合成了品系特异性引物/探针。在生物素标记的PCR扩增产物与固定在荧光编码微球上的品系特异探针杂交后,对微球进行流式检测。试验结果显示,13种转基因玉米的引物和探针具有较高的特异性,引物/探针相互之间无交叉扩增和非特异杂交,大部分转基因玉米品系的检测灵敏度达到0.1%水平,符合欧盟和其他国家有关转基因产品标识的要求。本方法的检测效率和准确性均高于传统方法,可作为进出口转基因产品和国内转基因检测的有效方法。 相似文献
100.