Notch信号通路相关分子在脊椎生长过程中的差异表达及其对软骨细胞分化的调控作用

目的探讨Notch信号通路相关分子在脊椎生长过程中的差异表达及其对软骨细胞分化的调控作用。方法采用RT-PCR检测各不同发育年龄段小鼠椎间盘Notch信号分子mRNA的表达情况,筛选调控脊椎正常生长发育的重要信号分子,并采用免疫组化法进行验证。用重组腺病毒介导Dll-1、Jag-1、骨形态发生蛋白-2(bone morphogeneticprotein-2,BMP-2)在髓核(nucleus pulposus,NP)细胞中过表达,RT-PCR检测软骨细胞特征性标志物蛋白聚糖(aggrecan,ACAN)和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COL2A1)的表达,甲苯胺蓝染色检测软骨细胞基质分泌情况。结果小鼠脊椎生长发育过程中,Notch信号分子mRNA的表达总体呈下降趋势,其中Dll-1、Dll-3、Jag-1下降趋势尤其显著;Dll-1和Jag-1广泛表达于软骨细胞胞膜,随着小鼠年龄的增大,二者在椎间盘中的表达显著下降;BMP-2过表达可促进NP细胞成软骨分化,ACAN和COL2A1表达升高,甲苯胺蓝染色增强;Dll-1、Jag-1过表达可显著抑制BMP-2诱导的成软骨分化效应。结论 Notch信号分子,尤其是Dll-1、Jag-1对正常脊椎生长及椎间盘软骨细胞的成熟分化具有明显的负性调节作用。     

Functionalization of single- and multi-walled carbon nanotubes with cationic amphiphiles for plasmid DNA complexation and transfection

The possibility of delivering DNA efficiently to cells represents a crucial issue for the treatment of both genetic and acquired diseases. However, even although the efficiency of non-viral transfection systems has improved in the last decade, none have yet proven to be sufficiently effective in vivo. We report herein our results on the functionalization of single-walled carbon nanotubes (SWNT) and multi-walled carbon nanotubes (MWNT) by two cationic amphiphiles (lipid RPR120535 and pyrenyl polyamine), their use for the complexation of plasmid DNA, and their efficiency in transfecting cells in vitro. The experiments have shown that the efficiency of transfection is higher when using SWNT instead of MWNT, and that transfection efficiency is similar or slightly higher when using nanoplexes (SWNT/lipid RPR120535/DNA) instead of lipoplexes (lipid RPR120535/DNA) and several orders of magnitude higher than that of naked DNA. This study therefore shows both that the transfection is better when using SWNTs and that it is dependent on the nature of the amphiphilic molecules adsorbed on the nanotubes.      

大肠杆菌E.coli HB101(pBR322) 高密度培养过程质粒的稳定性

通过正交实验考察了大肠杆菌E.coli HB101(pBR322)高密度培养过程中,不同培养条件对质粒的稳定性和β-内酰胺酶活力的影响. 结果表明,当温度在33~39℃、pH为6.4~7.2、DO为 40%~80%、 补料速率在5.4~10.8 g/h范围内变化,以及细胞密度达到27.3 g/L、比生长速率达到0.73 h-1时,质粒没有发生丢失现象,但在培养过程中β-内酰胺酶的活力降低.     

联用抗口蹄疫病毒重组多肽及DNA疫苗诱发豚鼠产生特异免疫应答

选择一株O型口蹄病毒（FMDV）外壳蛋白VPI中21－40位及141－160位氨基酸残基两个抗原表位,组成串联结构141－160（20AA）－21－40（20AA）－141－160（20AA）,并与大肠杆菌β－半乳糖苷酶相连,在大肠杆菌中表达了此融合蛋白。同时将编码此融合蛋白的基因克隆进真核表达载体中,构建成重组表达质粒pCDM8FZ1。将pCDM8FZ1DNA与融合蛋白混合,免疫豚鼠一次,观察豚鼠产生免疫应答情况。结果显示,豚鼠可产生抗FMDV中和抗体及特异性T细胞增殖反应,部分豚鼠能抵抗FMDV的攻击,保护率为50％,证明将DNA疫苗与重组多肽疫苗结合起来作一次免疫,是可望用于预防FMDV感染的新途径,值得进一步探索。     

重组鲈鱼生长激素的分离纯化及抗体制备

用IPTG诱导鲈鱼生长激素基因工程菌E.coli.RV308,使重组鲈鱼生长激素得以表达并分泌到周质空间,利用渗透休克法从菌液中提取间质蛋白,经DEAE-SepharoseCL-6B、矣丙烯酰胺凝胶电泳及SephadexG-75纯化后得到单一电泳纯的重组鲈鱼生长激素,并将此激素作为抗原制备抗体,可应用于鱼类血液中生长激素含量的测定。     

Recombinant Landscapes in the American City

How are urban actors, such as landscape designers, community groups, developers and local politicians, actively restructuring their environments to meet the challenges of the American city in the new global context? Grahame Shane outlines the approaches to landscape that have been emerging since the mid-20th century and are set to recombine urban assemblages whether they are located in historic city centres, postindustrial waterfronts or suburban sprawl. Copyright © 2007 John Wiley & Sons, Ltd.     

北方某水厂原水及处理过程中Ah受体效应的行为研究

以北方某城市给水厂的自来水为研究对象,采用重组基因酵母测定法对不同处理工艺单元出水的芳香烃受体(AhR)效应进行了检测.检测结果表明,原水具有明显的AhR效应经常规工艺处理后AhR效应不能得到很好的去除,而经臭氧-活性炭深度处理后,92%的AhR效应能够被有效去除.     

pEgr-ssEndostatin的构建及其在体外的辐射诱导表达

为探讨pEgr-ssEndostatin重组质粒转染B16细胞后接受不同辐射剂量以及接受同一剂量不同时程endostatin表达的规律。采用RT-PCR方法从鼠肝脏中扩增出Endostatin cDNA,连入信号肽,构建了pEgr-ssEndostatin重组质粒,用脂质体介导的转染法转染小鼠B16细胞,用ELISA方法检测B16细胞上清中endostatin的表达水平。结果表明的分泌型Endostatin序列与报道完全一致,Egr-1启动子和Endostatin cDNA正确插入表达载体pcDNA3．1;pEfr-ssEndostatin具有辐射诱导表达特性。提示小鼠Endostatin基因成功地被克隆和表达,Egr-1启动子具有辐射激活和诱导下游基因表达增强的功能。     

镭普克的制备及对小鼠H22肝癌的抑制作用

报道重组别藻蓝蛋白(rAPC,镭普克)表达菌株的20L高密度发酵、镭普克制备及对小鼠H22肝癌抑制作用的实验结果。采用两步发酵法最终OD600为36．18,比一步发酵法的40．16值低,但镭普克表达率是后者的1．8倍,为30．24％,镭普克生物量提高1．62倍。亲合层析结合分子筛层析纯化后,镭普克纯度可达98．03％。对小鼠H22肝癌静脉注射剂量为50mg/kg／d,抑瘤率为62．2％。初步的免疫实验结果表明,镭普克对淋巴B细胞功能具有增强作用。结果提示镭普克大规模生产的潜力和临床应用的可能性。     

水稻白叶枯病菌受寄主诱导基因的鉴定

用一个具链霉素（Ｓｍ）抗性并含无启动子ＣＡＴ基因的广宿主启动子探针质粒ＰＩＪ３１００，用鸟枪法在ＣＡＴ基因上游的ＢａｍＨ１克隆位，或插入水稻白叶枯病菌（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｏｒｙｚａｅｐｖ．ｏｒｙｚａｅ），用ＢａｍＨ１完全酶切的染色体ＤＮＡ片段，将重组质粒转化大肠杆菌ＥＤ８７６７在含链霉素的ＬＢ单板上筛选转化子。得到容量为６０００个转化子的克隆群体，其中２％的克隆含有水稻白叶枯病菌启动子活性片段，在平板上表现氯霉素（Ｃｍ）抗性。在帮助质粒ＰＲＫ２０１３的帮助下，通过三亲支配，将含有水稻白叶枯病菌启动子片段的重组质粒转移进野生型的水稻白叶枯病菌中去，在含链霉素的ＰＳＡ平板上筛选１６００个接合子，其中一个在平板上表现氯霉素抗性及含有组成表达的水稻白叶枯病菌启动子。随机选取２００个平板上对氯霉素敏感的接合子，接种用氯霉素处理的水稻感病品种金南风，得到１５个比对照明显致病的克隆。用其中一个含受水稻特异诱导启动子的重组质粒为探针，在水稻白叶枯病菌野生菌基因文库中筛选到２７个阳性克隆。