治疗用抗人T淋巴细胞分化抗原单克隆抗体与人体组织反应性的体外研究

应用免疫组化酶染色法及免疫细胞荧光染色法体外检测了 WuT_3(抗 CD_3),WuT_4(抗CD_4),WuT_8(抗 CD_8),WuT_9(抗 CD_71 或 TfR),WuTac(抗 CD_(25)或 IL-2R)等5种临床治疗用小鼠抗人 T 淋巴细胞分化抗原单克隆抗体(简称单抗)与25种正常人体组织的反应性。结果显示,WuT_3与髓质胸腺细胞,淋巴结及扁桃体中 T 细胞区细胞,脾白髓中动脉周围淋巴鞘细胞及胃肠道粘膜层淋巴细胞呈阳性反应。WuT_4与皮质胸细胞及大多数髓质胸腺细胞呈阳性反应。WuT_8与皮质胸腺细胞及少数髓质胸腺细胞呈阳性反应。WuT_4 和 WuT_8阳性细胞在淋巴结、扁桃体、脾脏及胃肠道粘膜中的分布与 WuT_3 阳性细胞基本一致,但数量依次减少。淋巴结和扁桃体的生发中心以及脾脏的脾小结中散在分布有少数WuT_3,WuT4及 WuT_8阳性细胞。此外,睾丸中散在分布个别 WuT_8阳性淋巴细胞。WuT_9与26%的骨髓细胞及个别皮质胸腺细胞呈阳性反应。WuT_9 尚与小肠粘膜肠腺底部细胞呈较强染色。WuTac 仅与个别散在的髓质胸腺细胞呈阳性反应。上述5种单抗与其它非淋巴组织及细胞基本呈阴性反应。     

含preS2免疫表位乙型肝炎表面抗原DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答

目的　探讨含preS2免疫表位基因质粒DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答。方法　质粒转染COS 7细胞 ,用ELISA法测定瞬时表达产物。质粒经碱裂解法大量提取 ,Sepharose 4FF柱层析纯化后 ,直接肌肉注射免疫NIH小鼠。检测小鼠的体液免疫和细胞免疫应答效果。结果　preS2表位多肽和HBsAg高效表达。免疫小鼠血清中检测到高滴度的抗 HBs和抗 preS2。淋转刺激指数SI和IL 2活性 ,质粒DNA疫苗与单纯主蛋白疫苗免疫对照组比较 ,差异有显著意义。结论　含preS2免疫表位基因质粒DNA疫苗能诱导NIH小鼠产生较强的体液免疫和一定强度的细胞免疫应答     

抗癌胚抗原单链抗体-PE40免疫毒素基因的克隆与表达

目的扩增抗癌胚抗原单链抗体(CEA-ScFv),与绿脓杆菌外毒素(PE40)进行重组及原核表达,旨在进一步研究重组蛋白CEA-ScFv-PFA0的靶向抗肿瘤作用。方法分别扩增抗癌胚抗原单链抗体的重链区、轻链区,用overlap PCR按照VH-VL的顺序连接,克隆至pMD18T载体中。再将VH-VL基因片段与含有.PE40的表达载体pET28a连接,转化B121(DE3),IPTG诱导表达。结果经DNA测序,其结果与设计完全相符。SDS-PAGE分析,在相对分子质量66000处可见明显表达带,表达量可占菌体蛋白总量的13％以上。免疫印迹表明重组蛋白具有PF40的抗原特异性。结论抗癌胚抗原单链抗体-PE40免疫毒素的成功克隆与表达,为进一步研究其生物活性奠定基础。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原的IgG全抗体表达载体的构建

目的构建抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)的IgG全抗体杆状病毒表达载体。方法用PCR方法扩增抗HBsAg抗体Fab片段的轻链(L)及重链Fd段(VH+CH1)基因片段,将杆状病毒载体pAC-k-Fc与L基因连接,重组为过渡表达载体pAC-k-L-Fc,再与Fd基因连接,构建重组表达载体pAC-HBs-Fc,并进行酶切鉴定及DNA测序分析。确定正确后,转染昆虫细胞sf9,用免疫荧光检测IgG的表达。结果PCR扩增的片段约650bp,与预期值一致。载体pAC-k-L-Fc和pAC-HBs-Fc的酶切片段和DNA序列与预期结果一致。转染sf9细胞呈阳性荧光反应,未转染细胞呈阴性荧光反应。结论已成功构建表达载体pAC-HBs-Fc,为表达抗人HBsAg的IgG全抗体奠定了基础。     

旅行商问题的免疫算法

介绍了一种模拟生物免疫系统自我调节功能的免疫算法(IA)和这种算法的基本步骤．基于旅行商问题，提出了IA的抗体表示方法、初始抗体的产生方法、抗体与抗原之间以及抗体与抗体之间亲和力的计算方法，构造了几种抗体生成算子．仿真实验表明IA具有较强的全局搜索能力．     

用于新型冠状病毒检测的纳米材料及生物传感技术

新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019, COVID-19)疫情大流行引起全球对此重大突发公共卫生事件的高度关注。新型冠状病毒(SARS-CoV-2)经过多次突变,出现传染速度加快、免疫逃逸、隐匿性传播等特性,令防控形势至今仍异常严峻。对患者的早发现、早隔离仍然是目前最有效的防控措施。因此,迫切需要快速、高灵敏的检测手段来甄别此病毒,以便及早识别感染者。本文简要介绍了SARS-CoV-2的一般特征,并针对核酸、抗体、抗原及病原体作为检测靶标的不同检测手段及最新进展进行分类概述;对一些光学、电学、磁学以及可视化的新型纳米传感器在SARS-CoV-2检测技术上的应用进行了分析。鉴于纳米技术的应用在提高检测灵敏度、特异性以及准确率上具有优势,本文详细介绍了新型纳米传感器在SARS-CoV-2检测中的研究进展,包括表面增强拉曼基生物传感器、电化学生物传感器、磁纳米生物传感器以及比色生物传感器等,并探讨了纳米材料在新型生物传感器构建中的作用和挑战,为纳米材料研究人员开发各种类型的冠状病毒传感技术提供思路。     

血清游离PSA/总PSA测定的临床应用评价

采用免疫放射分析法对血清总ＰＳＡ（Ｔ－ＰＳＡ）水平介于４－２０μｇ／Ｌ的１４１例良性前列腺增生（ＢＰＨ）患者、２３例前列腺癌（Ｐｅａ）未治疗患者、１１例前列腺癌已治疗患者进行血清游离ＰＳＡ（Ｆ－ＰＳＡ）,Ｆ／Ｔ－ＰＳＡ测定。经统计学处理：ＢＰＨ组与Ｐｃａ未治疗组Ｆ－ＰＳＡ及Ｆ／Ｔ－ＰＳＡ均有显著性差异（Ｐ〈０．０１）,对两项指标综合评价结果表明Ｆ／Ｔ－ＰＳＡ的总有效率（８９．９％）明显优于Ｔ－ＰＳ     

弓形虫STAg不同接种途径免疫小鼠诱导的免疫应答

目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)经滴鼻、灌胃和皮下注射3种途径免疫小鼠诱导的免疫应答。方法5~6周龄BALB/c小鼠32只,随机分为4组,分别以20μgSTAg滴鼻、灌胃或皮下注射免疫小鼠2次,间隔2周,对照组不作处理。末次免疫后14d脱颈椎处死小鼠,分离脾淋巴细胞和肠上皮内淋巴细胞(IELs)并计数,ELISA法测定血清、肠冲洗液中的弓形虫特异性抗体。结果滴鼻组和皮下注射组的脾淋巴细胞数量高于灌胃组和对照组,灌胃组与对照组相近。滴鼻组的IELs数量高于皮下注射组、灌胃组和对照组,皮下注射组和灌胃组与对照组一致。皮下注射组的血清IgG水平高于滴鼻组、灌胃组和对照组,滴鼻组略高于灌胃组和对照组,但差异无显著意义。滴鼻组的小肠冲洗液sIgA水平高于皮下注射组、灌胃组和对照组,皮下注射注射组和灌胃组略高于对照组,差异无显著意义。结论20μgSTAg滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答优于灌胃和皮下注射;皮下注射免疫小鼠诱导的血清IgG抗体水平高于滴鼻和灌胃,但其未能诱导黏膜免疫应答。     

Electrochemical detection of prostate-specific antigen based on gold colloids/alumina derived sol-gel film

An electrochemical immunosensor for total prostate-specific antigen (PSA) was fabricated based on anti-PSA antibody-functionalized gold colloids/alumina sol-gel film. The presence of colloidal gold provides a good microenvironment for the immobilization of biomolecules. The fabrication process of the immunosensor was characterized by cyclic voltammetry. A direct electrochemical immunoassay format was employed to detect PSA on the basis of the potential change before and after the antigen-antibody interaction. Under optimal conditions, the potential change was proportional to PSA concentration ranging from 4.0 to 13 ng mL^− 1 with a detection limit of 3.4 ng mL^− 1. In addition, the performance and factors influencing the performance of the immunosensor were investigated and optimized.     

雷洛昔芬抗体的制备及ELISA方法的初步建立

本文主要研究了雷洛昔芬抗体的制备和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)方法的初步建立。实验中采用丁二酸酐对雷洛昔芬进行衍生,合成了雷洛昔芬半抗原。采用碳二亚胺法,将雷洛昔芬半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原和包被抗原,并通过紫外光谱进行鉴定,结果显示雷洛昔芬与载体蛋白偶联成功。免疫大白兔制备了雷洛昔芬抗体,抗体效价达1.28×10~5,半数抑制浓度(half inhibit concentration,IC50)15.4μg/L,与其他类似抗雌激素药物没有交叉反应,说明所制备的抗体特异性好。通过优化抗原抗体反应浓度初步建立了雷洛昔芬ELISA方法,结果显示最佳抗原浓度为300μg/L,最佳抗体工作浓度为1:1.0×10~5,标准曲线在0.4~102.4μg/L范围内线性关系好,R~2=0.9853,最低检测能力0.4μg/L。本研究为进一步开发雷洛昔芬快速检测试剂盒提供了技术参考。