生物素标记的Tn抗原的合成

以全乙酰化的2-叠氮基半乳糖基三氯乙酰亚胺酯为起始原料,通过与L-苏氨酸衍生物的糖基化反应以及叠氮还原,并同时进行N-乙酰化的一锅法反应制得全保护的Tn抗原,在脱去苏氨酸上的氨基保护基后,含生物素的琥珀酰亚胺酯与Tn抗原上的氨基发生选择性胺解得到标题化合物.目标产物及重要中间体的结构都通过 1HNMR、13CNMR和MS进行了表征.     

Gold nanoparticle/DNA/methylene blue nanocomposites for the ultrasensitive electrochemical detection of carcinoembryonic antigen

A new signal amplification strategy employing nanocomposites composed of gold nanoparticles (GNPs) with DNA and methylene blue (MB) as labels has been developed to construct a novel immunosensor for the highly sensitive bioanalysis of carcinoembryonic antigen (CEA). To fabricate the label, DNA was first linked to GNPs through the formation of an Au–S bond. Next, the resulting bioconjugates were sequentially bound with MB via the guanine (G) bases in DNA specifically and then with secondary CEA antibody (Ab₂) via the crosslinking of glutaraldehyde (GA). The receptor–analyte complex is formed by the biorecognition of the as-obtained MB labeled Ab₂ with the primary CEA antibody (Ab₁) immobilized on the surface of a modified GNP/Chitosan (Chits) composite electrode. After the receptor–analyte complex has formed, square wave voltammetry (SWV) was employed to oxidize the labeled MB in order to detect the CEA. This immunosensor shows a linear response from 0.10 to 2.0 pg mL⁻¹ CEA with an improved detection limit of 0.05 pg mL⁻¹ as compared to the conventional immunoassay. In addition, this new protocol shows acceptable stability, reproducibility and good recovery (97.5–110.0%) for CEA in human serum with great potential for clinical applications.     

莱克多巴胺的抗原合成鉴定及其抗体的制备纯化

莱克多巴胺属于β-兴奋剂类药物中的苯乙醇类衍生物，具有显著改善动物饲料利用效率，显著提高胴体瘦肉率的生产性能，因为其具有严重的副作用所以H前该类药物在我国和其他国家是被禁用的。本试验通过连接剂butane-1，4-diol diglyciydylether把莱克多巴胺和载体蛋白BSA和OVA偶联成免疫抗原和包被抗原，并采用紫外全波长扫描和SDS-聚丙烯酰胺凝胶的方法对合成的抗原进行了鉴定。通过免疫兔子获得了RCT的多克隆抗体，然后又通过饱和硫铵沉淀和proteinA-Sepharose4B的方法对抗体进行了纯化。纯化的抗体表现出对RCT较高的特异性和灵敏性。     

以赭曲霉毒素A单克隆抗体建立竞争酶联免疫吸附分析方法的研究

本研究通过活性酯法合成赭曲霉毒素A人工抗原，免疫小鼠制备单克隆抗体，在此基础上建立了竞争ELISA检测方法，线性范围为200-6000pg／ml，检测下限为150pg／ml。单抗与赭曲霉毒素B的交叉反应率为35％，与桔霉素、黄曲霉毒素B1和展青霉素等毒素交叉反应低于0．01％。在小麦样品中的加标回收率为83％～116％，变异系数为9.4％-19．8％。测试23份样品，赭曲霉毒素A的含量在0．6～2．56μg／kg之间。     

菜克多巴胺人工抗原的光谱表征及免疫鉴定研究

盐酸菜克多巴胺(Ractopamine hydrochloride,RCT)是一种β-肾上腺素受体激动剂,即使极低剂量残留对人类健康也有危害.为了建立简单、快速并适应现场检测的免疫分析方法,必须先合成它的人工抗原并进行鉴定.通过对莱克多巴胺进行结构修饰,用碳二亚胺将结构修饰了的莱克多巴胺与牛血清蛋白相偶联,经透析得到纯的莱克多巴胺人工抗原并冷冻干燥备用.结果表明,紫外光谱图中合成的人工抗原的特征吸收峰介于蛋白质和莱克多巴胺的特征吸收峰之间;人工抗原红外光谱图中呈现莱克多巴胺和牛血清蛋白的红外特征吸收峰;通过竞争ELISA实验表明用合成的人工抗原免疫的Balb/c小鼠血清中产生了莱克多巴胺的抗体,三种方法综合鉴定结果表明,莱克多巴胺人工抗原合成成功,该人工抗原可以进一步用于制备抗莱克多巴胺的单克隆抗体.     

倍硫磷半抗原、人工抗原的合成和鉴定

为研究建立有机磷农药倍硫磷的免疫分析法,合成了1种倍硫磷半抗原和2种人工抗原。采用改进的方法将三氟硫磷与3-甲基-4-甲硫基苯酚、β-丙氨酸反应制备了倍硫磷半抗原,产物经薄层层析、^1HNMR和质谱鉴定为预期产物。分别将半抗原以活泼酯法、混合酸酐法与BSA、OVA偶联制备了人工抗原BZB和BGO,通过紫外光谱鉴定证明偶联成功。用TNBS比色法测定了BZB、BGO与载体蛋白的克分子结合比,分别为29：1和12：1。以BZB为免疫原免疫Balb／c小鼠,以BGO为包被抗原对小鼠血清进行间接竞争ELISA分析表明,小鼠经免疫后产生了针对倍硫磷的特异性抗血清,从而进一步证明抗原合成成功。本方法为研究建立倍碲磷的免疫分析方法奠定了基础。     

出血性大肠杆菌H7鞭毛抗原的诱导恢复及鉴定

从进口冻鸡翅中分离获得一株发酵山梨醇、缺失H7鞭毛抗原的出血性大肠杆菌O157:H7变异株,采用0.4%强营养软琼脂对该菌进行连续5代诱导培养,使其H7鞭毛抗原成功恢复。综合该菌的生物学特性、血清学及毒理实验结果确证为大肠杆菌O157:H7。该菌的检出为大肠杆菌O157:H7变异株的鉴定提供了有益参考。     

三唑磷多克隆抗体的制备及鉴定

采用活泼酯法将三唑磷半抗原(TZPM-Hap)与牛血清蛋白(BSA)和卵血清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原(TZPM-A-BSA)和包被抗原(TZPM-A-OVA),经紫外扫描证明人工抗原合成成功.用免疫抗原TZPM-A-BSA免疫雌性Balb/c小鼠,获得了特异性的三唑磷多克隆抗体.以所获得的抗体建立间接竞争酶联...     

甲胺磷人工抗原的合成与鉴定

采用重氮法直接用甲胺磷连接牛血清白蛋白合成了人工抗原。通过鉴定,该人工抗原的紫外吸收光谱呈现出与半抗原、载体蛋白的紫外吸收光谱均不同的吸收峰;红外光谱图中也同时呈现了半抗原与载体蛋白的特征吸收带;并测得人工抗原中甲胺磷与载体蛋白的结合比为15∶1,表明该人工抗原合成成功。     

红曲中桔霉素的免疫检测(Ⅰ)抗原与抗体的制备

桔霉素抗原与抗体的制备是其免疫检测研究的第1步。桔霉素与BSA／OV的反应起始摩尔比为6：1，得到桔霉素与BSA的连接物及桔霉素与OV的连接物摩尔比分别为3．12：1和2．87：1。以桔霉素与OV的连接物为免疫抗原，免疫BALB／c小白鼠，分析了抗体的产生进程、灵敏度与效价。注射抗原后的第45天开始有明显的抗体产生，第90天达到高峰，然后开始下降，抗体的ELISA效价达到1：2000，和游离半抗原(桔霉素)的竞争ELISA表明，抗体有很好的灵敏度。