RNA干扰SW480细胞HIF-1α双向凝胶电泳中横向拖尾的消除及条件的优化

目的建立RNA干扰结肠癌SW480细胞系,并对缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)双向凝胶电泳中的多个关键步骤进行优化,以消除横向拖尾。方法以携带针对HIF-1α两条干扰片段的pGenesil-11质粒转染SW480细胞,沉默HIF-1α。对双向凝胶电泳中样品裂解液、样品的处理方式、上样量及电泳条件等进行优化。结果转染第7天RNA干扰效果最好。RNA干扰后,SW480细胞蛋白用含有硫脲的裂解液B进行提取,以样品制备方法A进行处理后,上样200μg蛋白,延长除盐时间,聚焦50000伏小时,得到的双向凝胶电泳图基本没有横向拖尾,分离蛋白点1288±15。结论已成功建立了RNA干扰结肠癌SW480细胞系;优化的双向凝胶电泳可有效消除横向拖尾,为进一步分析、鉴定和寻找与疾病相关的蛋白质奠定了基础。     

椰毒假单胞菌酵米面亚种脉冲场凝胶电泳分型的研究

目的建立椰毒假单胞菌酵米面亚种的脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分型方法,并对29株分离株进行PFGE分型研究。方法分别选择5种限制性内切酶(XbaⅠ、SpeⅠ、NotⅠ、SmaⅠ、AscⅠ)酶切椰毒假单胞菌酵米面亚种染色体DNA以进行PFGE分析,并利用BioNumerics软件对分离株的指纹图谱进行聚类分析。结果NotⅠ、SmaⅠ和AscⅠ的酶切片段过小,而XbaⅠ酶切片段的大小适中但数量过多,不能获得清晰可辨的图谱,均不适于椰毒假单胞菌酵米面亚种的PFGE分型。SpeⅠ酶切的PFGE条带数量和大小适中、指纹图谱清晰可辨,对椰毒假单胞菌酵米面亚种具有足够的分辨率。结论本研究建立的PFGE分型方法可应用于椰毒假单胞菌酵米面亚种的分子分型和溯源。     

变性梯度凝胶电泳方法在内源微生物驱油研究中的应用

应用基于聚合酶链式反应(PCR)的变性梯度凝胶电泳方法(DGGE)分析了在高温、高压和厌氧条件下富集培养的油藏内源微生物16S rDNA。用化学裂解法(SDS)直接提取了油藏微生物基因组DNA,并以此基因组DNA为模板,用特异性引物对16SrDNA的V8和V9可变区进行聚合酶链式反应扩增。对长约400bp(碱基对)的扩增产物进行DGGE分离后,得到了分离较好的电泳图谱。结果表明,DGGE方法可以分离不同油藏微生物16S rDNA的V8和V9可变区的DNA扩增片断。在内源微生物驱油研究中,DGGE方法是在分子水平上分析油藏微生物群落结构和监测微生物群落动态变化的有效工具。     

蚯蚓自溶酶对菜粕中植物蛋白的影响

蚯蚓体内有极高活性的蛋白水解酶等酶类,利用这些酶水解自体蛋白,使之成为可溶性的小分子活性肽和氨基酸。蚯蚓中的氨基酸组成与禽畜体内组织蛋白质的氨基酸的组成相仿,并且水解产物中含有抗病和促进动物生长等多种功能的活性多肽。本实验为研究蚯蚓对菜粕中的植物性蛋白的水解作用,为利用蚯蚓处理植物蛋白,生产新型高质廉价饲料提供实验依据。     

柞蚕微粒子病蚕蛋白质组分变化的研究

罹微粒子病柞蚕幼虫血淋巴蛋白质量减少,随着龄期的增进,病症加重,蛋白质在质和量上的变化更为明显。４龄期Ｌｐ－ｓ６电泳带Ｒｆ值,病蚕小于健蚕;病蚕缺少Ｌｐ－ｍ９、Ｌｐ－ｆ１４电泳带;Ｌｐ－ｆ１６电泳带,病蚕蛋白质量高于健蚕。血淋巴蛋白质组分的变化,是微粒子原虫在蚕体内寄生与增殖所致。     

基于生物芯片的背包问题DNA算法

通过生物芯片上的DNA算法求解背包问题.先将给定问题的约束条件进行分解,然后将物品重量映射为DNA序列,再依次在设计好的生物芯片上进行链接反应、凝胶电泳、探针检测和放射自显影,最后得到问题的解.本文的工作是在生物芯片上实现DNA算法,求解优化问题的一次有益尝试.     

^7Li和^12C离子致DNA损伤的研究

脱氧核糖核酸(DNA)是生物体中一类重要的大分子。它是遗传信息的载体，也是辐射生物学效应的最重要的靶分子。电离辐射可引起DNA多种类型的损伤，其中双链断裂(DSB)是辐射所致生物效应中最重要的原初损伤。此实验旨在用原子力显微镜(AFM)研究重离子辐射诱发的DNA双链断裂。     

细菌质粒DNA的快速提取及检测

介绍一种质粒DNA的快速提取方法，所分离出的DNA纯度较好，全部操作仅在两只Eppendorf管中进行，含质粒DNA的上清液可直接点样走琼脂糖凝胶电泳。整个提取过程在较短时间内完成。该方法简便、快捷、效果好。     

2019年福建省哨点医院腹泻患者中致泻大肠埃希菌感染状况及病原学特征分析

目的 了解2019年福建省哨点医院腹泻患者中致泻大肠埃希菌(DEC)感染状况、毒力基因携带、分子分型及耐药情况。方法 采集腹泻患者210份粪便标本按照GB 4789.6—2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌检验》方法分离大肠埃希菌后进行荧光聚合酶链式反应(PCR)确认,并对分离出的DEC进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型及药敏试验。结果 共检出阳性菌株32株,检出率为15.2%(32/210),其中肠道致病性大肠埃希菌(EPEC)占37.5%(12/32),肠道集聚性大肠埃希菌(EAEC)占37.5%(12/32),产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)占25.0%(8/32)。药敏试验结果表明,32株菌对氨苄西林耐药程度最高,耐药率为78.1%(25/32),其次是四环素和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑,耐药率分别为62.5%(20/32)和59.4%(19/32)。多重耐药(MDR)率为50.0%(16/32)。PFGE结果表明,32株菌共分为28种PFGE带型,其中12株EPEC共分为10种带型,12株EAEC共分为10种带型,8株ETEC共分为8种带型,其中EPEC聚类分析结果有两组菌株具有100.0%相似带型,EAEC有一组菌株具有100.0%相似带型,ETEC聚类分析没有完全一致的带型。结论 2019年福建省哨点医院腹泻患者DEC感染主要以EPEC、EAEC为主,菌株分型带型存在多样性,菌株耐药状况严重,且存在较高的多重耐药率。     

鲜鸡蛋蛋壳表面细菌多样性分析

目的了解鲜鸡蛋蛋壳表面菌落构成及其随时间的变化情况。方法收集榆林、汉中和西安三个地市不同养殖场的鲜鸡蛋,于不同的时间点进行试验,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(polymerase chain reaction-denaturing gradient gel electrophoresis,PCR-DGGE)和胶回收测序的方法对细菌构成多样性和样品间相似性进行分析。结果与榆林组和西安组比较,汉中组的Shannon多样性指数和Dice相似性系数差异有统计学意义(P0.05),菌落构成主要为厚壁菌门(Firmicutes)和放线菌门(Actinobacteria),葡萄球菌属(Staphylococcus)、链霉菌属(Streptomyces)和乳酸杆菌属(Lactobacillus)为优势菌属。结论不同地区蛋壳表面的细菌存在多样性和复杂性,而存放初期和末期菌落的相似度较高。