RNA干扰研究前沿和应用领域

小RNA(MicroRNA，miRNA)的作用与应用研究继2001，2002连续两年被美国《Science》杂志评选为年度10大突破技术以来，2003年继续热度高涨，名列前矛。其核心技术RNA干扰(RNAi)，即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA(siRNA)代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因     

三维超声心动图评价基因转染骨髓干细胞移植治疗慢性缺血心肌价值

目的探讨动态三维超声心动图(DTDE)评价基因转染自体骨髓基质干细胞移植治疗慢性缺血心肌的价值.方法在猪冠脉左旋支放置Ameroid环建立慢性心肌缺血模型;4周后分组注射编码血管生长素(ANG)基因的腺病毒转染的自体骨髓基质干细胞(组Ⅰ)、编码ANG基因的腺病毒液(组Ⅱ)、单纯自体骨髓基质干细胞(组Ⅲ)和空腺病毒磷酸盐缓冲液(组Ⅳ、对照组);再4周后行病理学检查.应用脱机DTDE重建和分析技术,观测正常、置环后4周及注射后4周左室形状、容积和收缩功能的变化.结果慢性缺血心肌左室舒张和收缩末期容积(LVEDV、LVESV)增大,射血分数(LVEF)降低(P<0.01).注射后,对照组LVEDV、LVESV较其它各组明显增大(P<0.05),射血分数(LVEF)明显降低(P<0.05),与缺血时无明显差异(P>0.05).组Ⅰ～Ⅲ较慢性缺血时LVEDV和LVESV均缩小(P<0.05),LVEF均增大(P<0.05),各治疗组比较,左室重构现象均不同程度地减轻,组Ⅰ较其它组,左室容积减小及收缩功能改善最为显著.组Ⅱ和Ⅲ间测值比较无统计学差异.结论DTDE对评价基因转染自体骨髓基质干细胞移植治疗慢性缺血性心脏病具有重要价值.     

一种体内高效表达反义RNA、三链形成RNA及Ribozyme的新载体

为了在体内高效表达反义RNA,三链形成RNA与Ribozxyme,通过PCR克隆技术构建了一种全新载体pBSKnerrU6’。该载体利用hsnRNA U6基因表达单元的特性,保留了U6RNA分子5’端维持分子稳定性的发夹和帽式结构的序列,缺失了其中间参与mRNA前体剪切的部分,取而代之的是3个限制性内切酶位点,Hela细胞核抽提物体外转录实验证明该载体可有效地表达U6变体RNA分子,该载体携带新霉素抗性基因neo^r,因而可用于真核细胞核细胞稳定转染的筛选。     

实时心肌造影在基因转染细胞移植治疗慢性缺血心肌的研究应用

目的用实时心肌声学造影(RTMCE)研究基因转染骨髓基质干细胞移植治疗慢性缺血心肌的效果.方法实验动物(猪)分4组,建立慢性心肌缺血模型4周后,组Ⅰ注射编码血管生长素(ANG)基因的腺病毒转染的自体骨髓基质干细胞,组Ⅱ注射编码ANG基因的腺病毒液,组Ⅲ注射单纯自体骨髓基质干细胞;组Ⅳ(对照组)注射空腺病毒磷酸盐缓冲液.再4周后取心肌组织进行病理学检查.分别于正常状态、慢性缺血心肌模型建立4周和注射后4周开胸时进行RTMCE,选取左室乳头肌水平短轴切面,用闪烁显像观察局部心肌灌注显影情况.实时动态图像存入磁光盘,然后用MCE定量分析软件(CUSQ1.4)分析各阶段心肌灌注图像.结果RTMCE较满意显示了猪慢性缺血心肌基因治疗前后心肌运动和血流灌注状况.经定量软件对闪烁显像心肌再灌注分析,发现慢性缺血心肌模型各组左室侧后壁A值和β值均较正常心肌明显降低(P<0.01),组间比较无明显差异(P>0.05);注射4周后,组Ⅰ、组Ⅱ、组Ⅲ的A值和β值均增高,其中组Ⅰ增高最显著(P<0.01),组Ⅱ和组Ⅲ较对照组亦明显增加(P<0.05),对照组的A值和β值与缺血心肌无明显变化(P>0.05).结论RTMCE及其定量分析软件可对不同血供状态下的心肌灌注进行分析,评价基因治疗慢性缺血心肌的效果.     

刘德培

医药分子生物学专家，1950年5月4日出生，安徽省阜南市人。1986年毕业于中国协和医科大学，获医学博士学位。中国工程院副院长，中国协和医科大学基础医学院研究员。从事分子生物学教学和基因表达调控与基因治疗研究，发现马利兰可显著增加贫血恒河猴与地贫患者胎儿型珠蛋白基因表达。发现HS2是自基因的红系增强子；建立正常与多种突变的α与P珠蛋白基因簇转基因鼠模型，发现P—LCR与α—PCE的基因簇特异性作用及α—PCE中HS的协同作用；[第一段]     

基因治疗:基因生物技术的重要里程碑

<正>基因治疗是将人的正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入人体靶细胞以纠正基因的缺陷或者发挥治疗作用,从而达到治疗疾病目的的生物医学技术。基因治疗是当代医学和生物学一个新的研究领域。它试图从基因水平调控细胞中的缺陷基因表达或以正常基因矫正、替代缺陷基因,达到治疗基因缺陷所致的遗传病、免疫缺陷或抑癌基因的失活所致的肿瘤等疾病,即与基因相关的疾病。     

非病毒基因载体在肺癌基因治疗中的应用

对近年采用非病毒载体(裸DNA、阳离子聚合物、阳离子脂质体)治疗肺癌的基本原理和研究进展作一综述。此法有望成为治疗肺癌的新方案。     

肌细胞途径血友病B基因治疗高表达载体的构建及表达研究

构建了以ＭＣＫ（肌肉肌酸激酶）增强子增强、β－ａｃｔｉｎ启动子启动的、反向插入载体Ｇ１Ｎａ的Ｇ１ＮａＰＡＩＸｉ′ＢＡＭ。在与同一系列的、仅内含子元件有差异的载体Ｇ１ＮａＭＢＡＩＸ和Ｇ１ＮａＭＢＡｉＩＸ的体外体内表达比较证明，反向载体是表达最高最稳定的。进一步的二次体内注射研究表明，此载体是国内已报道的最适于肌细胞途径血友病Ｂ基因治疗的反转录病毒载体。     

我国生物技术的发展现状及重点关注领域浅析

全球生物技术产业正在蓬勃发展,各国政府都把推广生物技术、发展生物技术产业作为提高本国工业在世界经济中的竞争力的重要手段.本文把当前国内外生物技术发展情况做一比较,并提出了我国当前生物技术应重点关注的几个领域.     

双歧杆菌介导HSV-tk/GCV系统治疗大鼠膀胱癌的疗效

目的观察双歧杆菌介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶(Herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-tk)/丙氧鸟苷(Gancyclovir,GCV)系统治疗大鼠膀胱癌的疗效,并初步探讨其可能的作用机制。方法采用N-甲基亚硝基脲(N-methyl-nitrosourea,MNU)膀胱灌注法建立大鼠膀胱癌模型,将模型大鼠随机分为3组,分别经尾静脉注射生理盐水、携带空载体pGEX-5X-1的双歧杆菌和携带重组质粒pGEX-tk的双歧杆菌(含婴儿双歧杆菌4.4×109个/ml),再联合腹腔灌注GCV(50 mg/kg)治疗,治疗结束后称量各组大鼠膀胱重量;TUNEL染色法检测各组大鼠膀胱组织细胞凋亡情况,RT-PCR和Western blot法检测各组大鼠膀胱肿瘤组织细胞色素C(Cyt-C)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平。结果治疗后,双歧杆菌重组质粒组大鼠膀胱重量明显低于生理盐水对照组和双歧杆菌空载体组(P<0.001),膀胱组织细胞凋亡指数明显高于生理盐水对照组和双歧杆菌空载体组(P<0.001),膀胱肿瘤组织Cyt-C和caspase-9基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均明显高于生理盐水对照组和双歧杆菌空载体组(P<0.001)。结论双歧杆菌介导的HSV-tk/GCV治疗系统治疗大鼠膀胱癌疗效显著;该治疗系统可能通过以Cyt-C为中心的内源性凋亡途径导致膀胱癌细胞凋亡。