柯萨奇病毒A组16型疫苗的研发进展

柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)是引起手足口病(hand,foot and mouth desease,HFMD)的主要病原体之一。研发CA16疫苗对控制HFMD流行具有重要意义。本文探讨了CA16疫苗研发的必要性和可行性,并对CA16疫苗中和抗体检测方法、动物模型、重组病毒样颗粒(recombinant virus-like particles,rVLPs)疫苗及灭活疫苗等相关的研发进展作一综述。     

用于筛选人工结合蛋白的骨架蛋白

抗体作为最著名的天然结合蛋白,因其具有与抗原特异结合的特性,近100多年以来无论在生物技术领域,还是在疾病的诊断及治疗方面,都发挥着广泛而重要的作用。但是抗体自身固有的局限性也在很大程度上限制了它的应用,而人工结合蛋白既具有抗体的特点,又兼具更多优势:分子更小;稳定性更高;能在大肠杆菌中高产量、高可溶性表达;易于修饰;能够达到高亲合力和高特异性;并且与抗体没有知识产权的冲突,因此被称为理想的"新一代抗体"。人工结合蛋白是从基因改造构建而成的骨架蛋白库中针对特定的靶分子筛选而得的。从骨架蛋白的概念和设计,骨架蛋白的分类,应用骨架蛋白筛选人工结合蛋白的技术以及人工结合蛋白的应用和前景等方面进行总结概述。     

抗FGF-2纳米抗体抑制碱烧伤诱导大鼠角膜血管新生

目的：研究抗成纤维细胞生长因子（FGF-2）纳米抗体对碱烧伤诱导的大鼠角膜血管生成的治疗作用。方法：将SD大鼠分为：假手术组（Sham），模型组（Model，直径为3 mm的浸有1 mol/L NaOH溶液圆形滤纸贴于大鼠眼角膜中央处30 s，制备大鼠碱烧伤血管生成模型）和治疗组（Treatment，术后7天至21天用3 mg/mL的抗FGF-2纳米抗体溶液滴眼，每日3次，每次10 μL，共14天）。通过体视显微镜和CD31免疫组织化学染色计算大鼠角膜血管生成情况。实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附测定和免疫组织化学染色3种方法检测抗血管内皮生长因子（VEGF）和FGF-2的mRNA和蛋白表达水平。结果：（1）血管：治疗组较模型组的面积显著减少，血管管腔较窄（P<0.05），在药物干预14天后，差异最为显著；（2）FGF-2的mRNA和蛋白表达水平：模型组与治疗组的结果相近（P>0.05）；（3）VEGF的mRNA和蛋白表达水平：治疗组显著高于模型组（P<0.05）。此外，假手术组的持续给药也使得VEGF表达显著增加（P<0.05）。 结论：抗FGF-2纳米抗体可抑制由碱烧伤诱导的角膜血管新生，但也使得正常大鼠角膜或病理大鼠角膜的VEGF表达水平代偿性升高。     

住院患者HIV抗体检测阳性分析

目的:了解本院住院患者人免疫缺陷病毒(HIV)感染情况,提高医护人员防护意识,减少医源性感染。方法:对2009年10月-2013年12月本院收治的16 027例住院患者进行HIV抗体检测,HIV抗体初筛采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)和胶体硒快速法检测,阳性者送艾滋病确证实验室做蛋白印迹试验(Western-Blot,WB)确诊,并对其阳性结果进行分析。结果:在16 027例患者中共检出HIV抗体阳性557例,阳性率为3.48%。557例感染者分布于医院的各个临床科室;其中男380例,女177例,男女比例2.15:1;以中青年为主,21⁵0岁占80.25%;传播途径从以前静脉吸毒为主到现在以性行为传播为主,占38.06%;职业上以农民工比例最大,近年大中学生也传播迅速。结论:对住院患者进行HIV抗体的检测是发现HIV/AIDS的一条重要途径,同时对预防医源性感染具有重要意义。     

SLE患者血清IRF4与疾病活动性指数、抗SSA抗体的相关性分析

目的:探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者血清干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRF4)与疾病活动性指数(disease activity index,DAI)、抗SSA抗体的关系。方法:选取本院2012年1月-2014年12月SLE患者60例作为观察组,健康体检者55例作为对照组,采用酶联免疫吸附试验(EnzymeLinked Immuno Sorbent Assay,ELISA)法检测血清IRF4水平,Pearson相关性分析IRF4与DAI、抗SSA抗体的关系。结果:观察组血清干扰素调节因子水平明显高于对照组,DAI≥6分的系统性红斑狼疮患者血清干扰素调节因子水平明显高于DAI<6分的系统性红斑狼疮患者,抗SSA抗体阳性的的系统性红斑狼疮患者血清干扰素调节因子水平明显高于抗SSA抗体阴性的系统性红斑狼疮患者,比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关性分析发现,血清干扰素调节因子与DAI呈明显的正相关性(r=0.45,P<0.05),与抗SSA抗体呈明显的正相关(r=0.43,P<0.05)。结论:血清干扰素调节因子(IRF4)在系统性红斑狼疮患者中显著增高,其与疾病活动性指数、抗SSA抗体具有明显相关性,干扰素调节因子(IRF4)具有促进系统性红斑狼疮疾病的发生和发展。     

抗环瓜氨酸肽抗体阳性银屑病关节炎伴肺间质病变1例

银屑病关节炎是一种与银屑病相关的关节炎，属脊柱关节炎范畴，兼具或先后出现银屑病皮疹和关节及周围软组织疼痛、肿胀等表现。抗CC抗体是类风湿关节炎诊断及预后判断的重要指标，PsA中也有阳性报道。风湿病相关肺间质病变常见于系统性硬化症、干燥综合征、皮肌炎/肌炎、类风湿关节炎等，PsA相关肺间质病变报道少见。本文收录1例PsA患者，抗CCP抗体阳性，同时伴弥漫性肺间质病变，文献少有报道。     

布鲁菌Omp31蛋白的多克隆抗体制备与质量检测

本文以布鲁菌omp31基因作为研究对象,对重组蛋白的免疫原性进行了研究。结果显示:重组Omp31蛋白可以刺激家兔产生抗体,而且,抗体质量较好。     

果蝇Bves蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的为了进一步研究细胞粘附分子Bves在肿瘤的发生及转移过程中的作用,需要获得Bves蛋白并制备其抗体。方法根据Flybase网站所提供的Bves基因序列,以果蝇的总RNA为模板进行PCR扩增,得到Bves部分编码序列,随后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达载体。重组表达质粒经酶切测序鉴定后,转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,并用IPTG诱导融合蛋白的表达,使用活化的Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化后得到的His-Bves融合蛋白免疫注射新西兰大白兔制备Bves多克隆抗体,并用Western blot对抗体效价进行检测。结果和结论获得了Bves原核表达重组融合蛋白及高效价的兔抗Bves多克隆抗体,为后期深入研究Bves基因的功能奠定了基础。     

东亚钳蝎蝎毒的毒性及其F(ab’)_2抗体的制备

目的测定东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch,BMK)蝎毒的毒性,并制备能有效中和BMK蝎毒的F(ab’)2抗体。方法分别经腹腔和肌肉注射小鼠,测定不同产地(山西、山东、河南、辽宁)BMK蝎毒对小鼠的半数致死量(LD50);以山西产BMK蝎毒免疫云南矮种马,获得免疫血浆,经盐析、酶解、加热等步骤制备F(ab’)2抗体,采用ELISA、免疫扩散和小鼠体外中和试验分别测定超免血浆、纯化的IgG及F(ab’)2抗体对各地产BMK蝎毒的抗体效价。结果山西产BMK蝎毒的LD50最小,小鼠腹腔注射的LD50为1.67 mg/kg,肌肉注射LD50为2.06 mg/kg。制备的F(ab’)2抗体的纯度为86.5%;纯化的IgG稀释至1×10-9 mg/ml,抗体ELISA效价呈阳性,较纯化前(1×10-7 mg/ml)提高了100倍;纯化的IgG和制备的F(ab’)2抗体与山西产BMK蝎毒比例为0.4∶1时,免疫扩散试验出现清晰的沉淀线,与其他产地BMK蝎毒比例均为0.1∶1时,出现清晰的沉淀线;F(ab’)2抗体与山西产BMK蝎毒质量比为2∶1时,可保护小鼠100%存活。结论成功利用蝎毒免疫动物制备了高纯度的F(ab’)2抗体,该抗体可有效中和多个产地的BMK蝎毒。     

埃可病毒6型表面特异性抗原VP1的原核表达及其多克隆抗体的制备

目的原核表达埃可病毒6型表面特异性蛋白VP1,并制备其多克隆抗体。方法筛选VP1蛋白氨基酸序列中抗原性强的片段,优化基因序列,分别构建重组表达质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1。将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,进行15%SDS-PAGE鉴定。将融合蛋白VP1-GST及VP1-His分别用Glutathione resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化。以纯化后的VP1-His融合蛋白作为免疫原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,间接ELISA法检测血清抗体效价,Western blot法检测血清抗体特异性。结果经双酶切及测序鉴定证明,重组质粒p GEX-4T-2-vp1和p ET-28a-vp1构建正确。VP1-GST和VP1-His融合蛋白的相对分子质量分别为38 000和19 000,两种融合蛋白分别以可溶性蛋白和包涵体形式表达,约占菌体总蛋白的60%和30%,纯化后的纯度均90%。兔抗VP1血清效价为1∶320 000,可与融合蛋白VP1-GST和VP1-His发生特异性结合。结论成功原核表达了融合蛋白VP1-His和VP1-GST,且VP1-His具有良好的免疫原性,其制备的多克隆抗体的特异性较好,为埃可病毒快速检测技术的建立奠定了基础。