酪蛋白磷酸肽副产物中ACEI肽的分离鉴定及稳定性研究

酪蛋白磷酸肽副产物中仍含有丰富的功能性多肽,从中回收具有降压活性的血管紧张素I转化酶抑制肽具有废物利用和环境保护的意义。本文在前期研究富集活性肽工艺的基础上,从粗富集产物中进一步分离纯化出具有降压活性的多肽单体,并对单体的分子量、一级序列及其稳定性进行了研究。研究结果表明,以粗富集产物为原料,仅通过阴离子交换树脂及液相制备两步就可获得活性较高的转化酶抑制肽单体P16和P18。P16分子量742.6,序列为GPFPIIV,属首次发现;P18分子量1385.8,序列为FFVAPFPE VFGK。二者均具有较高的耐酸碱性和热稳定性,经体外模拟胃肠消化过程后,发生不同程度的分解,但P16的活性在分解后反而升高12.8%,P18则降低37.5%。推测活性的升高或降低均与活性中心暴露或破坏有关。     

红曲霉奶酪的生物活性研究及ACE抑制肽的筛选

研究红曲霉对奶酪成熟过程中生物活性肽,尤其血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制肽的影响。以不接种红曲霉的奶酪为对照组,研究奶酪成熟过程中的可溶性氮含量、α-葡萄糖苷酶抑制活性和ACE抑制活性,对红曲霉奶酪肽谱进行鉴定,利用生物信息学和分子对接等方法对潜在的活性肽进行筛选,并对筛选肽进行合成和评价。结果表明,相比于对照组,在pH 4.6和三氯乙酸条件下,奶酪成熟结束时的可溶性氮相对含量分别提高57.98%和38.34%,α-葡萄糖苷酶抑制活性和ACE抑制活性分别提高32.21%和73.98%。在红曲霉奶酪提取物中共鉴定到1 796种肽,其中51条ACE抑制肽、28条抗氧化肽、7条降血糖肽等。筛选到两种ACE抑制肽YPFPGPI和FPEVFGK,半抑制浓度分别为207.31μmol/L和410.61μmol/L,酶抑制类型均是非竞争性抑制。该研究提供了一种快速筛选ACE抑制肽的方法,证明奶酪中添加红曲霉能够有效提高ACE抑制活性,为挖掘红曲霉奶酪的功能特性潜力提供了参考。     

中药提取物及活性部位抑制血管紧张素转化酶活性的研究

目的筛选抑制血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)活性的中药及活性部位.方法采用体外模型比较8味中药提取物对ACE的抑制作用,并提取纯化抑制ACE作用最大的中药提取物的活性部位.结果 8味中药提取物均能抑制ACE活性.金银花提取物70%甲醇洗脱部位对ACE抑制率为87.3%,主要成分为绿原酸,重结晶纯度80.4%.结论金银花提取物对ACE具有较强的抑制效果,活性部位主要成分为绿原酸.     

佛手提取物及活性部位抑制血管紧张素转化酶活性的研究

目的：筛选不同溶剂佛手提取物对血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）的抑制作用及活性部位。方法：用HPLC法比较不同溶剂佛手提取物对ACE的抑制作用,并提取纯化抑制ACE作用最大的佛手提取物的活性部位。结果：不同溶剂佛手提取物中甲醇提取物对ACE的抑制活性最高,抑制率达到77%。佛手提取物40%甲醇洗脱部位对ACE抑制活性较高。结论：采用甲醇提取,大孔吸附树脂吸附,40%甲醇洗脱,获得对ACE酶具有较强抑制作用的佛手活性部位是可行的。     

ACE抑制肽的制备及其结构对活性的影响

血管紧张素转化酶（ACE）通过一系列的生理反应,从而起到升高血压的作用,在人体中过量ACE的产生会引起高血压,而生物活性物质ACE抑制肽能够抑制ACE的功能。文章主要综述了ACE抑制肽的主要制备方法及氨基酸序列特点与ACE抑制活性的关系,并阐述了脯氨酸对ACE抑制活性的影响,以及部分氨基酸的结构特点及功能,为今后ACE抑制肽的制备与应用提供参考依据。     

前蛋白转化酶枯草溶菌素9单克隆抗体生物学活性荧光染料标记法的建立、优化及验证

目的建立并优化前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)单克隆抗体生物学活性的荧光染料标记检测法,并进行验证。方法对建立的荧光染料标记法的细胞铺板密度(1×10~5、5×10~5和1×10~6个/mL)、PCSK9蛋白浓度(5、20、40、80μg/mL)、荧光标记的低密度脂蛋白(low density lipoprotein labeled with 1,1′-dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethyl-indocarbocyanine perchlorate,Dil-LDL)浓度(10、16、20μg/mL)、单克隆抗体的浓度梯度(200、52、20、12、8、4、0. 8μg/mL,200、30、10、6、4、1、0. 2μg/mL,200、28、9、6、4、2、0. 2μg/mL)进行优化,并对优化方法的专属性、准确度、精密度、线性范围、耐用性进行验证。结果最适方法检测条件:铺板密度为5×10~5个/mL,PCSK9蛋白和Dil-LDL浓度分别为20和16μg/mL,单克隆抗体的浓度梯度为200、52、20、12、8、4、0. 8μg/mL。该方法可特异性检测PCSK9单克隆抗体;供试品检测回收率在70%～130%之间;供试品检测结果的相对标准偏差(RSD)均10%;供试品效价在50%～150%之间时,检测值与理论值呈良好的线性关系,线性拟合方程为y=1. 002 x-0. 006 7,R~2=0. 997 8;耐用性检测活性均在70%～140%范围内。结论本实验建立的方法具有良好的专属性、准确度和精密度,可用于PCSK9单克隆抗体的生物学活性测定。     

计算机辅助的蛋白质降血压活性评估方法

目的 借助虚拟水解与分子对接软件, 建立蛋白质降血压活性评估函数。方法 采用Autodock软件将胃肠道蛋白酶水解可能产生的二、三肽与血管紧张素I转化酶(angiotensin I-converting enzyme, ACE)进行分子对接, 根据对接能量值对短肽的ACE抑制活性进行预测, 并对肽的结构特征进行了详细地分析和统计。基于肽段与ACE结合的能量值建立可评估食品蛋白质降血压活性(G值)的打分函数, 并对22条已知氨基酸序列的可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)蛋白质的降血压活性进行评估。结果 对于二、三肽, 由带电荷的氨基酸、芳香族氨基酸和脯氨酸组成的肽段更易与ACE结合, 此外, 酸性氨基酸(带负电荷)所组成的肽段也易与ACE结合。采用打分函数对22条可口革囊星虫蛋白质的降血压活性进行评估, 其中19条蛋白质具有较好的降血压活性。结论 可口革囊星虫是一种良好的降血压肽来源, 计算机辅助的基于对接能量值的ACE抑制活性预测以及打分函数建立对生物活性肽的研究具有重要的参考价值。     

小苗膜下移栽对烤烟硝酸还原酶、转化酶活性及致香物质的影响

为了更好地应用小苗膜下移栽技术,进行了小苗膜下移栽与常规地膜覆盖膜上移栽对比试验,对其生理效应进行了研究。结果表明,与常规移栽相比,采用小苗膜下移栽方式的根系阳离子交换量（CEC）分别在团棵期、旺长期、成熟期提高1.37、1.50、1.51倍,差异均达到显著水平;叶片硝酸还原酶（NR）活性分别在团棵期、旺长期、成熟期提高1.4、1.31、1.49倍;叶片蔗糖转化酶（INV）活性分别在团棵期、旺长期、成熟期提高1.2、1.4、1.4倍;烟株干物质积累,根部干重在团棵期、旺长期、成熟期分别提高2.7、1.4、1.2倍,在团棵期差异达到显著水平;叶片干质量在团棵期、旺长期、成熟期分别高于对照1.3、1.1、1.3倍,现蕾期差异达到显著水平;烟叶中性致香物质含量显著提高,尤其对香气质量产生重大影响的类胡萝卜素类降解产物总量提高1.51倍,类西柏烷类的茄酮含量提高1.47倍;烟叶化学成分品质指标更接近优质烟叶指标的要求。     

米曲霉β-呋喃果糖苷酶基因克隆及生物信息学分析

β-呋喃果糖苷酶水解蔗糖和低聚果糖,酶法生产高纯度低聚果糖,必须抑制或消除β-呋喃果糖苷酶的水解活性.本研究以工业生产低聚果糖的米曲霉菌株GX0015为研究材料,采用RT-PCR技术,克隆获得β-呋喃果糖苷酶基因(GenBank登录号:EU130944).利用生物信息学手段对β-呋喃果糖苷酶基因进行分析得知:该酶为456个氨基酸组成的亲水性膜外蛋白;功能域分析结果显示:该酶从第52个至第456个氨基酸残基之间序列属于糖苷酶32家族特征序列,并具有糖苷酶32家族酶活性中心的(N/G)DP(C/N)G和RDP保守序列;米曲霉β-呋喃果糖苷酶在进化树上的位置处于酵母菌的转化酶和细菌的六磷酸蔗糖水解酶之间.     

从麦胚蛋白质中制备降血压肽的研究

用超临界CO2对小麦胚芽脱脂，碱溶酸沉淀法提取麦胚蛋白，用8种蛋白酶分别进行单一酶和复合酶水解麦胚蛋白生产降血压肽，用高效毛细管电泳(HPCE)测定其活性。碱性蛋白酶生产水解物的活性最大，其对麦胚蛋白作用的最适pH为9，温度为50～55℃，加酶量为24AU／kg，水解度为16．5％时所得水解物对ACE有强烈抑制用。