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目的共表达新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F蛋白与鸡传染性支气管炎(infectious bronchitis virus,IBV)S1蛋白,纯化并分析其免疫原性。方法根据NCBI中NDV F及IBV S1片段基因序列,截取包含F及S1蛋白部分抗原表位基因片段,设计并合成引物,PCR扩增目的片段,依次连接至原核表达载体pET-32a(+)上,构建重组质粒pET-32a-F-S1,转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达,并对IPTG浓度和诱导时间进行优化,SDS-PAGE分析目的蛋白可溶性;重组蛋白经Ni-NTA agarose层析纯化复性后,Western blot法检测其反应原性。将14日龄雏鸡随机分F-S1、NDV F、IBV S1及PBS组,肌内免疫3轮,间隔10 d,每轮连续免疫5 d,每日1次,100μg/只,首次免疫后每隔7 d采集血清,ELISA法检测雏鸡血清特异性IgG水平。结果经双酶切鉴定,重组质粒p ET-32a-F-S1构建正确。重组蛋白最适IPTG诱导浓度为0. 2 mmol/L,时间为3 h;其以包... 相似文献
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曹欢欢 《中国生物制品学杂志》2020,(8):929-933
目的对人乳头瘤病毒18型(human papilloma virus 18,HPV18)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)进行特征分析。方法采用质谱技术分析HPV18 VLPs(重组大肠埃希菌表达系统表达L1蛋白,自组装成为VLPs)蛋白质一级结构,圆二色谱技术分析蛋白质二级结构,高效液相色谱、透射电镜和动态光散射技术分析蛋白质三级和四级结构;同时采用假病毒中和试验分析HPV18 VLPs的免疫原性,SDS-PAGE法分析样品纯度。结果HPV18 VLPs蛋白翻译后修饰主要包括氧化和去酰胺化,完整L1单体分子量约56 000;二级结构中螺旋、折叠、转角、不规则卷曲的比例分别为8. 4%、46. 1%、18. 5%、30. 2%;颗粒纯度达99%以上,且形态饱满完整,大小均一,直径约60 nm。HPV18 VLPs诱导小鼠产生中和抗体滴度的几何均值达3 000以上。HPV18 VLPs中完整L1单体含量达95%以上。结论 HPV18 VLPs结构完整,颗粒大小均一,纯度高,免疫原性良好,本研究为宫颈癌疫苗安全性和有效性的评价奠定了基础。 相似文献
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在病毒变种迅速大量出现,一个今天出现的病毒明天就会生出新变种,而后天又会有新的病毒出现的今天,人们对病毒见多不怪,但至少半年前就出现了的病毒却在最近突然成了反病毒厂家的头条新闻,不能不说有几分奇怪。如果说这个新闻的看点之一是翻出了一个半年前的病 相似文献
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