大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株的构建与表达

目的构建大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株,提高邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的产量。方法利用依赖于DpnⅠ酶的PCR方法突变表达载体pET-22b(+)-Trp Operon上的关键位点,PCR扩增Trp OperonM基因,构建pET-22b(+)-Trp OperonM重组表达质粒,经酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。制备粗酶液,经比色法测定邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性。结果 PCR扩增产物可见约7000bp的Trp OperonM条带;所构建的重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确;邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性比大肠杆菌BL21(DE3)空菌分别提高了4.5倍和5.2倍。结论已成功构建了大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株BL21(DE3)/pET-22b(+)-Trp OperonM,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性均有提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定了基础。     

带来好心情的食物

全麦面包 许多食物富含一种或多种氨基酸,各种氨基酸激烈竞争以求将信息传送到大脑。举例来说：吃几片全麦面包可以帮助氨基酸中的色氨酸的形成：它将使你心情放松,而后快乐。进入大脑的氨基酸,它形成血清素,这是起镇定作用的。血清素将是一种刺激性的抗忧郁剂。要达到上述目的,有个窍门是：吃面包前吃一些富含蛋白质的肉或奶酪,它将帮助色氨酸进人大脑时将其它氨基酸“挤出去”。     

快速水解法测定羽毛及其降解物中的色氨酸

通过提高水解温度,减少水解时间的前处理方法,用氨基酸自动分析仪测定羽毛及其降解物中色氨酸的测定值。分析结果表明,采用4mol/LLiOH、145℃、水解5h的快速水解法与常规前处理方法所测得色氨酸含量基本一致,方法回收率91%,变异系数2.24%。可缩短分析时间,且不影响分析结果的准确度。     

谷氨酸合成途径基因缺失对大肠杆菌发酵L-色氨酸的影响

降低谷氨酸的积累可提高L-色氨酸产量及糖酸转化率。敲除Escherichia coli TRTH中的谷氨酸脱氢酶及谷氨酸合成酶编码基因gdh A、glt B,构建TRTHA(TRTH,Δgdh A)、TRTHB(TRTH,Δglt B),考察gdh A、glt B缺失对L-色氨酸发酵的影响。结果表明,gdh A及glt B缺失能有效降低谷氨酸的积累,但会降低细胞生长及色氨酸合成;培养基中谷氨酸的添加可恢复TRTHA及TRTHB的生长及色氨酸合成能力。在含1 g/L谷氨酸培养基中,利用TRTHB发酵L-色氨酸,L-色氨酸产量(41.23 g/L)及糖酸转化率(15.45%)最高,较TRTH分别提高了10.92%和7.89%;谷氨酸生成量(5.72 g/L)及乙酸积累量(1.73 g/L)分别较TRTH降低了25.23%及提高了10.19%。TRTH和TRTHB代谢流分析结果表明,glt B缺失会降低谷氨酸合成代谢流并提高乙酸合成代谢流;TRTHB的色氨酸合成代谢流(11.4%)较TRTH提高了40.74%。     

采用补料生物反应器对产L-色氨酸发酵条件的优化

L-色氨酸在医药、食品和饲料等方面广泛应用,市场需求量不断增加。本文以L-色氨酸生产菌大肠杆菌TRTH在小型生物反应器上进行了发酵条件的摸索和优化,通过对接种量、发酵过程pH、供氧等发酵条件进行了优化,获得优化的L-色氨酸发酵工艺条件,在最优条件下产酸量可达12.3g/L。     

酶法合成中色氨酸的测定

建立了光度测定酶法合成中色氨酸含量的新体系。该检测体系不仅能准确地测定产物色氨酸的含量，且对底物吲哚能同时测定。有效地避免了其他色氨酸测定方法底物吲哚的干扰，通过标准加入法色氨酸及吲哚的回收率分别为９７．８％～１０３．３％，９７．６％～１０３％。实验证明该体系简单、实用，测定结果可靠。     

肝胆显像剂~(99m)Tc-(Sn)-吡哆醛色氨酸的制备及应用

作者制备了~(99m)Tc-(Sn)-吡哆醛色氨酸肝胆显像剂。通过动物实验发现其核素物理特性适合于显像条件;血液清除快、肝胆排泄迅速、泌尿道浓度小、毒性低,具有较强的抗胆红素能力。经初步临床应用证实其为一较理想的肝胆显像剂。     

锌（Ⅱ）-色氨酸-邻菲咯啉配合物的合成及其与DNA的作用和生物毒性研究

合成了一种新的锌（Ⅱ）-色氨酸-邻菲咯啉配合物[Zn（Trp）（phen）2]Cl·7H2O（Ⅰ）（Trp为L-色氨酸离子,phen为邻菲咯啉）。通过元素分析、红外光谱及热重一差热分析对其进行了结构表征。采用电子吸收光谱法、荧光光谱法及琼脂糖凝胶电泳法考察了其与DNA的作用,研究了配合物对斑马鱼胚胎的生物毒性,并与2种已知结构的锌-邻菲咯啉配合物[zn（phen）2]Cl2·5H2O（Ⅱ）和[zn（phen）]Cl2（Ⅲ）进行了比较。结果表明,配合物与鲑鱼精DNA作用大小顺序为配合物Ⅰ〉配合物Ⅱ〉配合物Ⅲ．但作用方式不同;在抗坏血酸存在下,配合物Ⅰ对pBR322DNA的切割作用最强;配合物对斑马鱼胚胎毒性作用大小顺序为配合物Ⅱ〉配合物I〉配合物Ⅲ。     

吲哚合成技术与应用现状

全球吲哚的生产能力为7000t/a,主要集中在美国、西欧和日本,煤焦油提取法与化学合成法并存。已工业化的化学合成法主要有3种:苯胺法、邻氯甲苯法和邻氨基乙苯法。我国目前还没有真正规模化的连续生产装置。吲哚及其衍生物可广泛用于医药、农药、香料、染料、食品和饲料添加剂等领域。     

L-色氨酸中试生产研究

为提高L-色氨酸发酵水平,在100L发酵罐上考察了不同操作条件对大肠杆菌发酵生产L-色氨酸的影响。结果表明不同操作条件对L-色氨酸发酵有显著影响。残糖浓度、补料方式、柠檬酸钠添加质量分数、接种量及溶氧量分别控制在5 g/L、溶氧控制脉冲补料、2 g/L、5%及10%～15%时,发酵效果最好,在1 m3罐上进行验证实验,L-色氨酸产量稳定在40 g/L左右。