重组猪源抗菌肽Cecropin P1在毕赤酵母中的分泌表达与活性研究

为构建活性表达重组猪源抗菌肽Cecropin P1的酵母基因工程菌,采用重叠区基因扩增拼接法设计并合成其编码基因,分别载入分泌型表达载体pPICZαB和pGAPZαA中,酶切线性化后电穿孔导入酵母细胞进行整合,经高拷贝整合子筛选以及表型筛选获得高效表达抗菌肽的重组菌株,经培养条件优化确定摇瓶发酵抗菌肽的最佳收获时间,据...     

红水河龙滩–岩滩生态调度发电影响研究

为缓解或部分消除人类筑坝活动对生态环境的负面影响,选取红水河龙滩-岩滩梯级水库为研究对象,运用逐月最小生态径流和逐月适宜频率生态径流等算法计算生态流量,兼顾下游四大家鱼产卵对于洪水脉冲的特殊需求,从生态基流和洪水脉冲两方面对梯级下泄流量进行调度研究。根据不同生态约束条件,设置四种生态调度方案:基本工程约束方案、最小生态流量约束方案、逐月适宜频率生态流量约束方案以及人工造峰-最小生态流量约束方案,分析各生态调度方案损失的发电效益影响。应用实例结果显示:单纯设置较高的生态基流会较为严重的影响发电效益,而将人工造峰与最小生态流量结合调度的模式可在几乎不损失发电量的前提下对河流下游特定生物的需水量进行补偿。     

小型拖拉机转向轴失效分析

对小型拖拉机转向轴早期出现的断裂原因进行了分析。结果表明,零件的内在质量、热处理工艺和热处理后的金相组织变化及硬度梯度小符合要求是其断裂的主要原因。并为其他类似轴类零件的设计与工艺提出一些建议。     

高碳高速钢轧辊中合金元素的作用及成分设计

高碳高速钢轧辊具有良好的抗高温磨损和抗热疲劳性能,在热轧钢生产中获得了广泛的应用。本文对高碳高速钢轧辊中各种元素的作用进行了详细分析,并设计了耐磨高速钢轧辊成分,应用于热轧棒材轧机上,获得了良好的使用效果。     

浙江省农村公共环境的现状和治理对策探讨

农村环境治理是建设新农村的重要组成部分,它直接影响农村经济的可持续性发展。笔者调查研究了浙江省农村公共环境的状况和污染特点,列举了垃圾处理的几种方式和优缺点,探索性地提出了农村公共环境的治理对策和管理模式。     

房屋面积测算的方法及其计算机的应用

主要就房产测绘中房屋面积测算的方法进行了论述,并就其中计算机的应用进行了探讨,着重介绍了面积测算的作业流程及利用Auto Lisp语言用户化AutoCAD的方法,从而给绘图和计算工作带来方便,提高了工作效率。     

基于转录机器全局扰动筛查迟钝爱德华菌毒力相关基因

目的通过转录机器(RNA聚合酶)σE因子过量表达实现全局转录扰动,筛查迟钝爱德华菌(Edwardsiellatarda,E.tarda)毒力相关基因。方法从E.tarda EIB202中PCR扩增RNA聚合酶σE因子编码基因rpoE,连接到载体pACYC184上,构建rpoE基因过量表达菌株;在克隆rpoE基因时引入突变,使该基因表达失活,构建移码突变失活菌株。感染模式生物斑马鱼,检测各菌株半数致死剂量(LD50),RT-PCR法检测各菌株rpoE及其下游调控基因degP、fkpA、plsB、lpxD、yfiO mRNA的转录水平。结果重组质粒pACYC184-rpoE经双酶切及测序证实构建正确;在102、103、104和105CFU/g注射浓度下,空载体转染菌株和rpoE基因过量表达菌株的毒力差异无统计学意义(P>0.05);与空载体转染菌株相比,rpoE基因过量表达菌株rpoE基因mRNA的转录水平上调9.5倍;与rpoE基因移码突变失活菌株相比,rpoE基因过量表达菌株rpoE基因下游调控基因degP、fkpA、plsB、lpxD、yfiO分别上调6.9、2.64、2.85、2.38、1.34倍。结论成功构建了E.tarda rpoE基因过量表达菌株以及移码突变失活菌株,初步确定degP、fkpA、plsB、lpxD、yfiO 5个基因与E.tarda毒力相关。     

鳗弧菌Vibro anguillarum MVM425sh高效电转化条件的优化

目的建立高效的鳗弧菌电转化系统。方法分别从感受态细胞制备的洗涤缓冲液与浓度、复苏培养基、二级细胞收获时间、电转化的电压与脉冲时间等方面,对鳗弧菌的电转化条件进行优化。结果获得的鳗弧菌最佳转化条件为二级培养3h左右收获细胞,用272mmol/L蔗糖洗涤缓冲液制备电转化细胞,在2.0kV3ms的脉冲条件下,pUC18的转化率达106个转化子/μgDNA。结论采用优化的电转化方法,可获得较高的转化率,为鳗弧菌中的常规遗传操作奠定了良好的基础。     

不锈钢管制管模的热处理

制管模是制作不锈钢管型材必不可少的工具。图1是不锈钢管制管模的外形结构，图中R面为工作面，依D、H、L取值不同有多种规格。一套模具总数量达50余件，生产过程中，模具分成若干段，每段由一对凸凹模组成，相互衔接，平稳传动，完成制管生产的纵剪、成型、拉延、整形、定径等工序。     

大肠杆菌链长控制基因ddsA原位替换及多基因共表达对辅酶Q10合成能力的影响

目的 强化大肠杆菌合成辅酶Q10(CoQ10)的能力.方法 利用途径工程的基本原理,对大肠杆菌辅酶Q生物合成途径中链长控制基因ispB进行遗传操作,并强化表达该途径中多个功能基因.结果 首次成功用来自Gluconobacter suboxydans的十聚异戊二烯焦磷酸合成酶基因ddsA原位替换大肠杆菌染色体上ispB基因,构建得到原位替换株JKL;同时强化表达CoQ生物合成途径的相关基因,发现在ubiCA和ddsA协同表达的重组菌pDCA/JKL中CoQ的合成能力比JKL提高了2.3倍,CoQ10合成量提高了2.5倍.检测该重组菌中ubiA的转录水平,发现其mRNA相对拷贝数是对照JKL的125倍.结论 成功获得的重组大肠杆菌在降低内源性CoQ8合成能力的同时具备合成较长侧链CoQ10的能力,且通过强化表达相关基因使合成CoQ10的能力得到了提高.