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目的 通过构建麦胚无细胞蛋白合成系统(wheat germ cell-free protein synthesis system, WGCF)体外表达人成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21, FGF21)。方法 构建FGF21克隆载体对FGF21基因进行克隆, 提取DNA后通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)扩大底物浓度并体外转录成mRNA。制备麦胚抽提物溶液, 加入反应底物、能源物质和相关酶系构建WGCF。以mRNA为模板利用WGCF体外合成FGF21重组蛋白, 利用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)对纯化后的FGF21重组蛋白进行检验, 并计算WGCF合成FGF21重组蛋白的产量。结果 成功利用构建的WGCF表达了FGF21蛋白, 最终合成产量为12.49 ng/mL。结论 以麦胚抽提物为核心的WGCF可以正确合成具有复杂结构的真核蛋白, 为小麦制粉副产物麦胚的深层次开发利用提供有效手段和研究方向。 相似文献
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