新型还原酶的挖掘与设计及手性醇的制备

为了解决生物催化制备手性化合物用催化剂需求的不足、还原酶催化过程存在酶活性低和底物浓度限制的问题。基于基因挖掘技术和还原酶保守序列分析,经筛选和设计获得了新型还原酶SDR05;采用单因素实验和Box-Behnken法,构建了表达还原酶SDR05的重组菌不对称还原[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙酮(BTAP)制备相应手性醇的反应体系。结果表明,重组菌在以体积分数为69%异丙醇、3.9 mmol·L^-1氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD⁺)、1mmol·L^-1MgCl₂、300 g·L^-1重组菌、3 000 mmol·L^-1 BTAP和pH为7.4磷酸缓冲液组成的反应体系和32℃、150 r·min^-1条件下催化反应18 h,产物产率和对映体过量值分别为98.3%和99.9%。研究结果丰富了还原酶库,实现BTAP底物在高质量浓度下的转化,为工业化制备(R)-1-[3,5-二(三氟甲基)苯基]乙醇等手性化合物奠定基础。     

分泌型人胸腺素α1基因工程菌高密度发酵工艺的研究

探索分泌型重组人胸腺素α1工程菌的高密度高表达发酵工艺.在摇瓶培养获得大肠杆菌分泌型重组人胸腺素α1融合蛋白发酵的最佳条件的基础上,用15 L自控发酵罐进行分批补料培养,发酵中分阶段限制性流加氮、碳源,保持溶氧在30%以上,OD600约为25的时候,添加0.5 mmol/LIPTG于28℃诱导10 h.最终菌体密度OD600可达40以上,目的产物占菌体总蛋白25%以上.分泌型人胸腺素α1基因工程菌高密度发酵工艺的建立为工业化生产重组人胸腺素α1提供基础.     

基于测量不确定度理论的电能计量装置整体误差性能评估与控制研究

电能计量装置的准确性关系贸易结算的公平公正、电网运行的经济安全。现有相关技术标准规定了电能表、互感器的误差控制要求,但对由电能表、互感器及其回路组成的电能计量装置的综合误差性能指标,尚缺乏准确量化的定义。文中以测量不确定度理论为基础,论述了不同典型条件下电能计量装置的各标准不确定度分量、合成标准不确定度以及整体扩展不确定度的计算评定方法与允许综合误差限值的确定方法,为电能计量装置综合误差性能评估,以及电能表、互感器装出前的优化组合选配提供技术依据与方法。     

聚乙烯醇降解酶发酵过程模拟

应用Matlab软件对聚乙烯醇降解酶发酵过程数学模型进行最优参数估计和非线性曲线拟合,得到了假单胞菌Pseudomonas sp XT11-Z90S发酵生产聚乙烯醇(PVA)降解酶的菌体生长、底物PVA消耗和聚乙烯醇降解酶合成的数学模型.结果表明,模型计算值和实验结果非常接近,其平均相对误差绝大部分小于10％,说明所建数学模型能较好地对聚乙烯醇降解酶发酵过程进行模拟.     

Thermomyces lanuginosus ZJB09222脂肪酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达

Thermomyces lanuginosus脂肪酶(简称TLL)是具有重要商业应用价值的脂肪酶之一。运用RT-PCR技术,从Thermomyces lanuginosus ZJB09222基因组中克隆得到885 bp脂肪酶基因cDNA序列,其结构基因编码蛋白包含292个氨基酸。将脂肪酶基因cDNA序列开放阅读框克隆到大肠杆菌表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),构建了基因工程菌E.coli BL21/pET28b-TLL。诱导表达后SDS-PAGE电泳显示该脂肪酶分子量约为32 ku。筛选获得廉价重组菌培养基,表达条件优化结果表明,当OD600约为0.6～0.8时,加入IPTG至终浓度为0.1 mmol/L,在28℃诱导培养7 h,酶活达到41 U/mL。     

基于嵌入式平台的某型网络设备测试工装的研究与设计

<正>某型网络设备产量非常大,但现有的生产检测效率低,主要体现在现有的生产检测测试环境搭建非常复杂,需要自制陪测设备四种各一台、还需要两台交换机、一台路由器、以及一台外购服务器,搭建这套测试环境所需成本也非常高,在测试时还需要人工手动输入测试命令,生产效率极低。为了实现在生产线上对该型网络设备进行自动检测和自动生成测试记录,通过研制一款测试工装,     

人胸腺素α1基因工程菌的构建与表达

胸腺素α1(Thymosin alpha 1,Tα1)是一种针对T淋巴细胞的免疫增强剂,临床用途广泛.为大量制备Tα1,按大肠杆菌惯用密码子合成编码Tα1的基因,克隆于pUCmT,转化E.coli JF1125,经测序证明序列正确后,克隆入pET39(b)的BspT I和BamH I位点,成功地构建出包含信号肽,DsbA,连接肽,6个His,EKsite(Asp-Asp-Asp-Asp-Lys),胸腺素α1的表达载体,转化E.coliBL21(DE3),获得胸腺素α1基因工程菌.SDS-PAGE分析表明,经0.1 mmol/L IPTG和30℃诱导8 h,在大肠杆菌周质中大量表达表观分子量31 kD左右的融合蛋白.为进一步获得大量可供实验研究和临床应用的重组胸腺素α1创造条件.