异硫氰酸酯类香料对两种革兰氏阴性致病菌的抑制作用

选取9种异硫氰酸酯类香料,研究其对常见的两种革兰氏阴性致病菌——副溶血性弧菌和沙门氏菌的抑菌活性。通过倍比肉汤稀释法测定最低抑菌浓度,根据OD600nm值绘制生长曲线。使用荧光定量PCR方法研究异硫氰酸酯类香料对副溶血性弧菌主要的毒力基因——tdh基因表达的影响。结果表明,调整香料浓度为0.04mol/L时,异硫氰酸苄酯、异硫氰酸3-甲硫基丙酯、异硫氰酸苯乙酯、异硫氰酸丁酯和异硫氰酸4-戊烯酯对两种供试菌均有明显的抑制作用(P0.05)。其中异硫氰酸苄酯的抑菌效果最佳,对副溶血性弧菌和沙门氏菌的最低抑菌浓度分别为9.54μmol/L和2.44 mmol/L。异硫氰酸苄酯对tdh的基因表达具有抑制作用,并且有浓度依赖性。综上,异硫氰酸苄酯对两种革兰氏阴性致病菌有很好的作用效果,苄基对异硫氰酸酯类香料抑制革兰氏阴性致病菌有一定的影响,说明异硫氰酸苄酯香料可作为抑制致病菌的添加剂应用。     

应用SYBR Green Ⅰ溶解曲线检测食源性单增李斯特菌

基于单增李斯特菌hlyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因分别合成两对引物,确立SYBR Green Ⅰ荧光PCR检测单增李斯特菌两个特异性基因的最佳反应体系及条件,反应液经凝胶电泳验证,验证结果显示,扩增出的两条不同大小、不同Tm值的目的核酸片段,分别对应两条荧光PCR溶解曲线上的两个独立波峰.基于单增李斯特菌hlyA基因建立标准曲线,相关系数为0.996,最低检出限约为89CFU/mL.为检验方法的可行性,对鲜活白蚬子样品中分离出的疑似菌株进行实际检测,所得阳性结果经国家标准方法(GB 4789.30-2010)验证,验证结果表明,SYBR Green Ⅰ荧光PCR实际检测阳性结果与GB 4789.30-2010检测结果一致.     

仿刺参肠道可培养微生物多样性研究

为了解大连地区仿刺参肠道可培养微生物种群的多样性信息,用2216、TCBS和葡萄糖琼脂培养基从大连地区冬、春两季的仿刺参肠道中共分离得到141株细菌,通过16SrDNA-RFLP分析后,得到17个不同的类群。从各个类群中随机选取代表菌株进行16SrDNA序列测定和系统发育分析,结果表明,大连地区仿刺参肠道细菌主要包括假单胞菌属（Pseudomonas）,弧菌属（Vibrio）,芽孢杆菌属（Bacillus）,希瓦氏菌属（Shewanella）,交替假单胞菌属（Pseudoalteromonas）,不动杆菌属（Acinetobacter）,气球菌属（Aerococcus）,发光菌属（Photobacterium）,葡萄球菌菌属（Staphylococcus）和Kushneria菌属共10个菌属。说明大连地区仿刺参肠道可培养微生物具有一定的多样性。     

桑黄菌丝体液体发酵培养条件的研究

利用响应面分析法对影响桑黄菌丝体产量的液体发酵培养条件进行了优化。研究碳源,氮源,生长因子对桑黄菌丝体产量的影响。在单因素试验的基础上,利用Box-Benhnken设计和响应面分析法对碳源、氮源、维生素对菌丝体产量的影响进行分析。试验结果表明,桑黄的最佳液体培养条件:玉米淀粉0.5%,酵母膏0.1%,VB1 0.1%,培养时间6d,得到桑黄菌丝体干重为18.43g/L。     

沙门氏菌能力验证样品制备

目的研究制备适用于沙门氏菌(Salmonella)能力验证(PT)检测项目的冷冻干燥样品,通过能力验证确定实验室或检查机构的校准、检测能力。方法对目标菌与干扰菌进行10倍梯度稀释,对不同稀释度的菌液进行菌落计数并计算菌浓度,确定沙门氏菌与干扰菌的添加量,以冻干的绿豆粉为基质,脱脂奶粉为冻干保护剂,将细菌混合物与冻干保护剂混合均匀,采用真空冷冻干燥方式分别制备沙门氏菌能力验证阳性样品与阴性样品,采用西林瓶真空包装、4℃冷藏贮存;通过随机抽样和鉴定以评估样品的均匀性,通过观察样品在90 d内不同温度下目标菌的测试结果以评估样品的稳定性。结果每个样品最终添加10~100 CFU目标菌,添加104 CFU干扰菌;抽检的样品均能有效鉴定,显示PT样品具有较好的均匀性;通过保存温度和时间的稳定性检验显示测试结果符合预期效果,PT样品具有较好的稳定性。结论建立了有效的沙门氏菌能力验证样品制备的方法与评价程序。     

二烯丙基二硫醚对单增李斯特菌毒力基因表达的影响

二烯丙基二硫醚(DADS)是一种典型的硫醚类香料。该类香料在抗菌消炎,提高机体免疫力,预防和治疗心血管疾病等保健及药理作用方面具有显著效果。而对其在食源性致病菌中的抑制作用及相关机理研究较少。四大食源性致病菌之一单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)容易感染食物而引发脑膜炎、败血症及孕妇流产等一系列恶性疾病。本研究以如何高效抑制单增李斯特的生长为出发点,以DADS为研究对象,采用微量肉汤稀释法初步筛选出其对单增能李斯特菌的最小抑菌浓度(MIC),利用RT-qPCR技术考察其对单增李斯特菌毒力基因inlA、hlyA、prfA表达的影响。结果表明:亚抑菌浓度下DADS均可显著抑制毒力基因inlA、hlyA、prfA的表达,且抑制作用呈现一定的浓度依赖性,hlyA及prfA对其作用更敏感。     

生物胺降解菌Staphylococcus xylosus JCM 2418 的特性研究及应用

从鱼露中筛选获得一株具有生物胺降解能力的木糖葡萄球菌——Staphylococcus xylosus JCM 2418,对其安全性、发酵性能进行评价同时对生物胺降解相关酶展开分析,并将其接种至发酵食品中进行应用,监测发酵食品生物胺降解率以及风味的变化情况。结果表明,S.xylosus JCM 2418 表现出弱耐药性,不具有溶血性,不产生生物膜;具有良好的耐盐性、蛋白酶和脂肪酶活性;生物胺降解相关酶为细胞膜上的胺氧化酶;应用在发酵食品中,可以有效控制生物胺的积累,同时改善发酵产品的风味,为提升发酵产品品质提供优良菌种。     

榆耳菌丝体多糖的体外抗氧化活性研究

利用乙醇分级沉淀法获得50%醇沉榆耳多糖、70%醇沉榆耳多糖及85%醇沉榆耳多糖,比较其抗氧化能力。结果表明:85%醇沉榆耳多糖的还原能力及对DPPH·的清除作用最强。0.5mg/mL85%醇沉榆耳多糖对DPPH·的清除率达到83.0%,IC50=29.94μg/mL。0.3mg/mL70%醇沉榆耳多糖对OH·的清除率达到84.3%,IC50=0.124mg/mL。榆耳菌丝体多糖清除超氧阴离子效果不理想,清除率仅为8.6%。榆耳菌丝体多糖具有较高的抗氧化活性。     

Pseudomonadaceae sp.胆固醇氧化酶产酶条件优化及其初步纯化

Pseudomonadaceae sp.可以发酵生产胆固醇氧化酶。本文对Pseudomonadaceae sp.进行产酶条件的优化及产物的初步分离。确定其最适培养基及培养条件,优化后胆固醇氧化酶的酶活力可达1691.72U/L,比优化前839.35U/L有较大提高。经过(NH4)2SO4沉淀及Sephadex G-75凝胶过滤层析初步纯化后酶比活力达24.95U/mg,纯化倍数为9.18。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定大豆中26种农药的残留量

目的建立高效液相色谱-串联质谱测定大豆中26种农药的多残留分析方法。方法样品经乙腈提取,乙腈饱和正己烷脱脂后,经C18固相萃取柱净化,采用高效液相色谱-串联质谱进行测定。结果 26种农药均在20 min分钟内流出,相关系数r在0.99以上,回收率均在65.28%~114.67%之间,重现性良好,相对标准偏差在10%以内。结论本方法可一次性检出大豆中26种农药残留,且简便、准确,适合大批量样品的测定。