羊乳制品中牛乳成分的荧光定量PCR检测方法研究

选取牛、羊线粒体12S rRNA基因的特异性引物,以新鲜牛、羊乳样品提取模板DNA,建立了基于DNA结合染料(SYBR Green I)的实时荧光定量PCR方法,用于羊乳制品中牛乳成分的掺假鉴别检测。结果表明,该方法最低可检出新鲜羊奶中掺入2.5%的牛乳成分,并应用于11份市售羊乳制品样本中的牛、羊源性成分的鉴别。基于DNA结合染料的定量PCR检测无需电泳分离和设计标记DNA探针,具有快速、灵敏、低成本和高通量等优点,可以作为羊乳及其深加工制品中牛乳源性成分掺入检测的有效手段之一。     

新冠病毒的现场可视化LAMP检测及其冷链食品分析应用

建立了一种基于环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)和核酸分子"光开关"[Ru(phen)₂dppz]²⁺相结合的新型冠状病毒高灵敏可视化检测方法。分别采用保温杯代替实验室恒温装置,采用蓝光手电代替蓝光透射仪,实现了新冠病毒的现场快速可视化LAMP检测。针对新型冠状病毒N基因设计特异性序列引物,采用[Ru(phen)₂dppz]²⁺分子光开关的特性检测LAMP扩增产物,结果可以借助蓝光手电直接通过肉眼观察是否出现红色荧光进行判定。该方法可检测到单个拷贝数的新型冠状病毒基因片段,并具有高度特异性,检验快速,整个过程仅需40min即可目视观察结果。对新冠病毒假病毒人工污染的模拟冷链食品进行检测,结果与目前新型冠状病毒检测金标准实时荧光定量PCR法吻合度为100%。该方法仅需保温杯和蓝光手电,可以作为实时荧光PCR方法的补充,为食品新冠病毒的现场筛查提供快速高效的技术支持。     

羊乳及其制品中掺入牛乳成分的双重PCR检测

根据牛、羊的线粒体12SrRNA基因为靶基因设计合成两对特异性引物,建立了羊乳中掺入牛乳的双重PCR检测方法,对鲜乳中快速DNA提取进行了快速法和磁珠法的比较研究.结果显示,利用快速法提取出的DNA纯度欠佳,羊乳中能检测出牛乳10%的掺入比例,而利用磁珠法提取的DNA纯度高、重复性好,在羊乳及其制品中掺入牛乳检出值能达到1%,将该检测方法应用于巴氏杀菌乳和不同品牌市售羊奶粉的掺假牛乳的检验验证.以磁珠法来提取DNA,双重PCR检测方法可以作为羊乳及其制品中掺入牛乳源性成分的有效手段之一,为羊乳行业的掺假行为提供一定技术依据.     

乳及乳制品中乳铁蛋白含量的快速SDS-PAGE荧光检测方法

该研究采用新型的Chromeo P503（P503）染料替代考马斯亮蓝染色方法,以克服脱色染色步骤繁琐、耗时长（≥5 h）的不足,建立一种乳及乳制品中乳铁蛋白的快速简便十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis,SDS-PAGE）检测方法。P503染料标记蛋白产生强烈的红色荧光发射,在30 min内一步操作即可完成,并且进行脱铁处理后消除乳铁蛋白铁饱和度对于荧光信号的干扰,保证定量的准确性。根据凝胶成像图中78 ku蛋白条带是否存在及其灰度值的大小,实现乳铁蛋白的定性与定量检测。在优化的实验条件下,线性范围为15~75 μg/mL,检出限为5.11 μg/mL,加标回收率在75.79%~108.09%之间,表明该方法具有较高的灵敏度和准确性。SDS-PAGE和P503结合无需进行肝素亲和柱前处理,便可直接应用于乳及乳制品中乳铁蛋白快速简便的准确定量检测,P503染料标记还可以用于其它乳蛋白的SDS-PAGE快速低成本定量检测, 从而为乳品质量控制和营养评价及加工工艺研究提供有力工具。     

乳及乳制品中乳铁蛋白的全自动高通量毛细管凝胶电泳检测方法研究

全自动毛细管凝胶电泳是一种简单、快速的DNA片段定性定量分析方法.本研究利用乳铁蛋白和DNA序列的特异性结合,建立了一种操作简便、分析时间短、高通量的全自动毛细管凝胶电泳检测乳铁蛋白的方法.实验中根据全自动毛细管凝胶电泳后游离DNA序列的峰面积是否减少以及减少程度实现乳铁蛋白的定性定量检测.结果表明:该方法特异性、准确...     

羊乳中牛乳成分的环介导等温扩增高分辨熔解检测

为了提高检测效率,节省时间、试剂和样本,建立了基于高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)的双重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术用于羊乳中牛乳成分的检测。通过引物设计优化,牛引物目标产物的Tm值在80℃,羊引物目标产物的Tm值在83℃,由于在传统熔解曲线中峰型有交叉重叠,同时检测存在干扰,因此使用HRM技术,实现了2种不同动物源性成分的有效区分。该方法特异性好,不需要针对牛、羊源性成分单独进行检测,当体系中存在其中一种或两种都存在时都可将其快速检出,且对其他物种没有交叉反应及假阳性现象的发生,成功应用于市售羊乳及其制品的检测。     

骆驼乳及其制品中非热变性乳铁蛋白含量的快速电泳迁移检测

骆驼乳具有丰富的营养价值和保健功能，但其活性蛋白—乳铁蛋白对热处理加工工艺敏感，因此骆驼乳及其制品中非热变性乳铁蛋白含量的快速测定对其生产工艺控制和营养价值评估至关重要。文章研究了乳铁蛋白热变性对DNA结合的影响，发现特异性的DNA序列仅能够结合非热变性驼乳铁蛋白而不结合热变性乳铁蛋白，据此建立了骆驼源乳铁蛋白的快速电泳迁移检测方法，仅需5 min即可完成一个样品检测，检出限为5.45μg/mL。该方法无需肝素亲和柱富集提取等复杂的样品前处理步骤，即可直接检测样品中活性乳铁蛋白含量，可用于包括骆驼乳在内的各种特色乳制品热加工工艺的精准控制及乳制品营养价值的评估。     

不同来源乳中乳铁蛋白含量的高通量毛细管凝胶电泳检测

本研究在前期建立的毛细管凝胶电泳检测牛源乳铁蛋白的基础上，通过筛选分别能够与人源乳铁蛋白、羊源乳铁蛋白特异性结合的DNA序列，实现了母乳及羊奶粉中人源乳铁蛋白、羊源乳铁蛋白的快速准确定性定量检测。该方法采用非标记DNA探针替代荧光标记的DNA，进一步降低了检测成本，不需要复杂的样品前处理操作，仅需2 min即可完成一个样品的检测，对人源、羊源乳铁蛋白的检出限分别为11.74μg/m L、3.53μg/m L，可作为适用于其他特色生鲜乳（牦牛乳、骆驼乳、驴乳等）中乳铁蛋白含量的一种通用性检测方法。