牦牛乳中主要过敏原的分离纯化

为研究牦牛乳蛋白质的过敏性,用化学方法分离牦牛乳中主要的过敏原蛋白质,采用快速蛋白纯化系统(FPLC)结合凝胶层析技术对分离出的蛋白质进行纯化．在牦牛脱脂乳中添加10％醋酸至酪蛋白的等电点pH46,使酪蛋白和乳清蛋白分离．根据酪蛋白在尿素溶液中的溶解度和对钙的敏感性不同,对酪蛋白进行粗分级,得到αs酪蛋白和β酪蛋白．应用离子交换色谱和葡聚凝胶sephadex G100进一步纯化粗分级得到的酪蛋白,得到αscasein和β酪蛋白．以柠檬酸钠为螯合剂、在低pH并有盐存在的条件下从酸乳清中分离出β乳球蛋白,FPLC纯化后用RPHPLC检测其纯度,得到αscasein和β酪蛋白纯度分别为8713％和8858％,β乳球蛋白的纯度为8000％．     

牦牛乳中主要过敏原研究

为分析牦牛乳中主要的过敏原,腹腔注射牦牛乳蛋白质免疫Balb／C小鼠．未次免疫后,小鼠摘眼球取血,测定特异性抗体和组胺质量浓度．在无菌条件下收集并培养脾淋巴细胞．Western-Blotting方法分析牦牛脱脂乳中主要过敏原组分．结果显示,牦牛脱脂乳中主要的过敏原组分为β-乳球蛋白、α-酪蛋白和β-酪蛋白,这3种过敏原蛋白质致敏强度的大小为β-乳球蛋白>α-酪蛋白>β-酪蛋白．因为脾淋巴细胞产生的细胞素IL-4、IL-5质量浓度较高而IFN-γ较低,所以牦牛乳蛋白质为Th2应答．