非融合海参溶菌酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶活鉴定

利用实验室已构建好的表达载体pET32a(+)-SjLys,在基因工程菌RoSetta(DE3)plysS中表达重组融合海参溶菌酶rSjLys。利用融合的组氨酸标签,通过Ni 2+-NTA层析柱分离、纯化,获得高纯度的重组海参溶菌酶。利用重组牛肠激酶在22℃、pH 7.4、16h条件下对目的蛋白rSjLys的融合标签Trx-His-S tag进行完全酶切,通过Ni 2+-NTA层析柱纯化得到纯度大于99%的非融合的海参溶菌酶SjLys。实验结果表明,作为i型溶菌酶,与rSjLys比较,非融合海参溶菌酶对指示菌溶壁微球菌具有明显的抑菌作用。     

铝膜的电解腐蚀

一、引言铝膜光刻质量的好坏直接影响着集成电路的成品率和可靠性。目前铝光刻通常采用酸或碱溶液化学腐蚀法。在磷酸化学腐蚀法中,由于所产生的氢气附在铝膜的表面,因而妨碍了继续腐蚀,可能造成互连引线间的短路使电路失效;同时腐蚀终点较难准确判断,容易造成腐蚀过头,不利于窄条光刻。用氢氧化钠加铁氰化钾溶液腐蚀铝膜的方法克服了上述磷酸腐蚀的缺点,虽利于窄条光刻,但却引入钠钾离子可能会污染器件。此外,当铝膜较厚时,这种腐蚀液对光刻胶的浸蚀也不能忽视。为了克服上述缺点提出了电解腐蚀法,我们经过一个阶段的试验,现将初步结果总结如下。     

海参铜锌超氧化物歧化酶原核表达载体的构建、表达及活性鉴定

采用原核宿主大肠杆菌BL21(DE3)成功表达了具有活性的仿刺参铜锌超氧化物歧化酶(Apostichopus japonicus Cu/Zn-superoxide dismutase,Aj-SOD1)蛋白。利用Trizol法从海参肠组织中提取总RNA,通过反转录PCR扩增获得Aj-SOD1基因的编码序列(GenBank:JX097096.1,459bp),构建克隆载体pMD18-Aj-SOD1;在目的基因两端引入(XhoⅠ/NdeⅠ)酶切位点,构建克隆载体pMD18-AjSOD1(XhoⅠ/NdeⅠ)。将此载体与表达质粒pET30a(+)分别双酶切后连接,构建重组表达载体pET30a-Aj-SOD1。转化至大肠杆菌BL21(DE3),Kan+抗性筛选阳性转化子,获得基因工程菌BL21(DE3)-pET30a-Aj-SOD1。SDS-PAGE和邻苯三酚自氧化法检测发现,经0.1 mmol/L IPTG诱导8h后,成功获得具有抗氧化活性的Aj-SOD1蛋白。