赤霉菌原生质体外源基因高效转化方法研究

赤霉素(gibberellic acid,GA)是一种非常重要的植物生长调节剂,具有促进植物种子萌发和生长等功效.生产上用的赤霉素主要通过水稻赤霉病菌藤仓赤霉(Gibberella fujikuroi)工业发酵而来.赤霉菌工业生产菌株不产生孢子,不易进行以孢子为受体的外源基因转化.本研究建立了工业赤霉菌原生质体制备以及以原生质体为受体、利用电击高效转化外源基因的方法.结果发现崩溃酶(Dryslase)和溶壁酶(Lysing enzyme)以3:7的质量比混合时对赤霉菌原生质体的制备效果最好.电压为0.8～1.0kV的范围内原生质体的转化率最高,1μg DNA可以得到18个转化子.提供的方法不仅可以用于藤仓赤霉工业菌株的遗传改良,还可以用于水稻赤霉病菌分子生物学研究.     

氯氰菊酯降解菌的分离鉴定及降解特性研究

从浙江施用氯氰菊酯的茶园、果园采集的58份土壤样品筛选了1株能以氯氰菊酯为惟一碳源生长并具有降解氯氰菊酯能力的细菌LQK-14.通过生理生化特征和16SrRNA基因序列同源性分析,鉴定该菌株为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida).菌株LQK-14降解氯氰菊酯的最适温度为25~30℃,最适pH为7,外加氮源显著影响菌株的降解效能,无机氮比有机氮更利于农药降解,在适宜的培养条件下7d内将100mg/L氯氰菊酯降解了88%,其降解酶定域在胞内.     

应用多重PCR技术快速检测抗虫转基因水稻

通过优化PCR扩增体系中缓冲液的浓度、退火温度、引物的组合及其浓度等参数,建立了转基因水稻及其加工品中几种外源基因成分的多重PCR检测体系.利用该体系检测CaMV35S、NOS、CrylAc或CryIAb的三重PCR条件为:缓冲液工作浓度2.0x、引物各为0.2μM、退火温度为58℃,循环数为35个.缓冲液工作浓度为1.5x,其他条件不变,可进行CaMV35S、NOS、Bt和CpTi的四重PCR检测.缓冲液工作浓度为1.0x,其他条件不变,可进行CaMV35S、NOS、Bt和hpt的四重PCR检测.该多重PCR检测体系具有特异性好、简便、快速、准确等优点,能够有效地检测出转基因水稻质量百分比含量(w/w)0.1%的转基因成分.