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目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)Rv0057-Rv1352融合蛋白,并通过化学发光酶免疫法分析其抗原性,以评价其应用价值。方法根据Rv0057和Rv1352蛋白序列,合成Rv0057和Rv1352基因片段并进行扩增,分别插入质粒pET30aSETB中,构建重组质粒Rv0057/pET30aSETB和Rv1352/pET30aSETB。用NheⅠ和XhoⅠ双酶切重组质粒Rv1352/pET30aSETB,SpeⅠ和XhoⅠ双酶切重组质粒Rv0057/pET30aSETB,将回收的Rv1352基因片段插入Rv0057/pET30aSETB质粒中,构建重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB,转化感受态大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的包涵体蛋白经His.Bind蛋白纯化试剂盒纯化后,以其作为抗原建立化学发光酶免疫分析法,检测患者血清中抗结核抗体,并与市售M.tb抗体诊断试剂盒和痰涂片法进行比较。结果构建的重组质粒Rv0057-Rv1352/pET30aSETB的核苷酸序列与设计序列完全一致;表达的重组融合蛋白Rv0057-Rv1352相对分子质量约为30 500,主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的30%;纯化的重组融合蛋白的浓度为1.6 mg/ml,纯度为95%;以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测患者血清中抗结核抗体的灵敏度和特异性分别为66.70%和90.00%,而市售M.tb抗体诊断试剂盒的灵敏度和特异性分别为80.00%和63.33%;30例活动性肺结核患者经痰涂片检测,灵敏度为20.0%,化学发光酶免疫分析法检测灵敏度为66.7%,二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功制备了M.tb Rv0057-Rv1352融合蛋白,以其为抗原建立的化学发光酶免疫分析法检测抗结核抗体具有较高的灵敏度和特异性,在结核病血清学快速诊断方面具有广阔的应用前景。 相似文献
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结构模型的振动台试验是研究工程结构抗震性能的重要方法,正确处理模型与原型的相似关系以及由模型反应正确推导原型反应是很重要的问题。本文以4层框架结构为例,探讨了原型与人工质量模型和欠质量人工质量模型的相似关系,采用有限元分析程序计算原型与模型的地震反应,由模型地震反应反推原型地震反应,将原型地震反应的计算值和反推值从基本自振周期,加速度,速度,位移,基底剪力方面进行了比较,从而得出在弹性阶段内动力相似关系的正确性。 相似文献
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格里斯试剂比色法测定肉制品中亚硝酸盐含量 总被引:1,自引:0,他引:1
采用格里斯试荆比色法测定市场上常见的火腿类产品中亚硝酸盐的含量,结果表明:采用格里斯试刺比色法测定肉制品中的亚硝酸钠含量时选择的最大吸收波长应为550 nm,实验得到的标准方程为y=0.0 181x 0.0034,相关系数R2=0.9995,线性良好.该方法测定时重复性和稳定性均较好,重复操作过程中产生的误差较小,样品处理后在2 h内完成测定即可.另外,通过回收性实验还证明该方法的回收率较高,在96%以上.样品在测定的时间内稳定性和重复操作读取的数值不会有变化. 相似文献
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中水是指生活污水经过处理后,达到一定的水质标准,可在一定范围内使用的非饮用水。中水的利用是解决我国水资源紧缺的一个有效措施。本文用分析化学的实验方法对中水中铁离子的含量进行了分析。采用的水样来自包头市城市绿化用水及包头某大学化学实验室用水,两者测定条件相同,并将两者的测定结果与生活用水标准进行了对比分析。 相似文献