HPV16型免疫胶体金诊断试纸条的制备

建立一种快速、准确、简便检测高危型人乳头瘤病毒16型的胶体金诊断试纸条,以用于宫颈癌的早期筛查。用柠檬酸三钠还原法制备了酒红色的30 nm胶体金颗粒,胶体金颗粒标记的单抗的实际标记量为6μg/mL。选用了2种稳定剂BSA和PEG20000获得了稳定的金标抗体溶液。实验结果表明:第7种样品垫处理液和第7种结合垫处理液处理样品垫和结合垫组装的试纸条效果最好;试纸条检测HPV16E6蛋白为阳性,检测HPV16L1蛋白为阴性。     

三聚氰胺单克隆抗体的制备及鉴定

制备了抗三聚氰胺(melamine)单克隆抗体,鉴定了其免疫学特性并建立三聚氰胺标准抑制曲线。以人工合成抗原Melamine-BSA免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术建立分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的细胞株,以体内诱生腹水法生产三聚氰胺单抗,用硫酸钠盐析法提纯,以直接竞争ELISA法建立三聚氰胺标准抑制曲线。获得了1株能稳定分泌抗三聚氰胺单克隆抗体的杂交瘤细胞株H2C6。用间接ELISA方法测定腹水单抗效价为2×10-7。经金标免疫层析实验鉴定单抗与三聚氰胺特异性结合,H2C6杂交瘤细胞株单抗对三聚氰胺的半数抑制浓度(IC50)为4.15μg/mL。除与三聚氰酸交叉反应性为72%外,与三嗪及各类抗生素等交叉反应性都小于5%。体外多次传代培养和反复冻存复苏后抗体分泌稳定。     

胶体金免疫层析法快速诊断禽流感

建立了一种简便、快速、准确检测动物禽流感病毒(AIV)的胶体金免疫层析法(GICA).具体内容包括制备胶体金标记抗AIV单克隆抗体和羊抗AIV抗体,结合垫和样品垫的处理,组装免疫层析试纸条.检测动物AIV,进行敏感性和特异性评定.结果表明:测试条灵敏度可达10 ng/ml.与进口禽流感胶体金免疫层析试剂条比较,符合率达100%.本方法具有特异性强、灵敏度高、简便快速的特点,可用于禽流感的早期诊断.     

一起鸭疫里默氏杆菌病的诊治

针对鸭疫里默氏杆菌病传染快,死亡率高,往往造成严重经济损失的情况,分离鉴定出该病病原菌.用分离出来的菌株制成油乳剂灭活疫苗,配合药敏试验筛选的敏感抗生素进行治疗与预防,可迅速控制病情.     

HPV16 E6基因原核表达质粒的构建

对构建HPV16 E6基因的原核表达质粒pET28a(+)-HPV16 E6进行研究.从宫颈癌细胞株CaSki细胞中提取的的DNA基因组为模板,设计一对特异性引物,用PCR法扩增出HPV16E6基因片段.HPV16E6基因片段和质粒pET28a(+)经NcoⅠ和HindⅢ双酶切后用T4 DNA连接酶连接.构建的重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6转化大肠杆菌DH5α,经PCR鉴定和酶切鉴定筛选出阳性克隆,将阳性克隆的质粒转化到大肠杆菌BL21 Star-DE3 Plyss中,构建了HPV16 E6基因原核表达质粒pET28a(+)-HPV16E6.HPV16E6基因原核表达质粒pET28a(+)-HPV16 E6的构建为HPV16 E6重组蛋白的制备和为宫颈组织HPV16型感染的早期诊断和相关治疗性疫苗的研制奠定了物质基础.     

两项禽流感发明专利介绍

介绍了禽流感免疫胶体金诊断试纸及测试卡发明专利和禽流感压电免疫传感器检测仪专利.主要阐述了两项发明专利的基本原理和发明所涉及的内容.两种诊断方法都能检测患病动物血液、组织液和粪便中的AIV.禽流感免疫胶体金试纸条敏感性达10 ng/ml,用10 min时间可得出检测结果;禽流感压电生物传感器检测仪敏感性达20 ng/ml,30 min出检测结果.两种诊断方法都能用于禽流感患病动物的快速诊断.     

红细胞吸附释放法纯化新城疫病毒

制备50%的醛化红细胞,将新城疫病毒(NDV)感染的鸡胚尿囊液采用醛化红细胞吸附释放法进行纯化,然后分别对纯化的病毒液及弃去的上清进行血凝检测,并与差速离心法进行比较,结果表明:使用50%的醛化红细胞基本能将病毒全部吸附,SDS-PAGE电泳显示其纯度较高,因此醛化红细胞吸附释放法是一种经济实用、操作简便,并有较高纯化效率的方法.     

牛乳制品中青霉素酶Alphalisa的检测方法

建立牛乳制品中青霉素酶Alphalisa的检测方法。将青霉素酶进行生物素化,与样品中的青霉素酶竞争结合鼠源性青霉素酶单克隆抗体,利用Alphalisa反向竞争的反应模式,对牛乳中的青霉素酶实施检测。建立的Alphalisa检测方法能特异性识别样品中存在的青霉素酶,方法的线性范围在2.5～500 IU/mL;检出限和定量限分别为1.6 IU/mL和5 IU/mL;批间批内变异度均小于10%。结果表明,该方法能够替代传统酶联免疫吸附实验方法,成为青霉素酶的实验室筛查或检测方法。     

HPV16 E6基因在大肠杆菌中的表达

在大肠杆菌中表达HPV16 E6重组蛋白.利用自行构建的重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6,经IPTG诱导表达HPV16 E6重组蛋白.实验结果表明,重组质粒pET28a(+)-HPV16 E6在大肠杆菌中经IPTG诱导成功表达出HPV16 E6重组蛋白.HPV16E6重组蛋白的制备为宫颈组织中HPV16型感染的早期诊断和宫颈癌治疗性疫苗的研制奠定了物质基础.