嗜热菌Geobacillus Kaustophilus HTA426磷酸三酯酶在毕赤酵母GS115中的表达

将嗜热菌Geobacillus Kaustophilus HTA426中的磷酸三酯酶基因转入毕赤酵母GS115中,整合到染色体DNA基因组上,并进行诱导表达.SDS-PAGE和Western-blot试验结果显示,重组蛋白是一个分子量约为50KD的磷酸三酯酶二聚体.酶活检测证明重组蛋白具有较高的磷酸三酯酶活性,其最适温度为70℃,最适pH为10.0.     

北京棒杆菌AS1.299高丝氨酸脱氢酶突变体D206G的酶学性质表征

高丝氨酸脱氢酶(HSD)是天冬氨酸族氨基酸合成途径的关键酶,在苏氨酸和蛋氨酸生物合成中起到重要作用。将来自于北京棒杆菌AS1.299的HSD在E. coli BL21(DE3)中成功构建并进行高效异源表达。通过分子对接与同源序列比对发现,206位点参与底物结合,并且在家族中高度保守,因此对突变体D206G进行研究。结果表明：突变体最适pH7.5,最适反应温度37℃,半衰期为4h,并对金属离子和有机溶剂显示出良好的抗性。同野生型相比,突变体Km值减小,可能是由于侧链官能团减小,空间位阻降低,有利于底物结合。     

杏仁中苦杏仁苷的提取分离纯化

本试验采用水提取法、乙醇提取法对苦杏仁苷进行提取,并对两种提取方法进行比较。结果表明：水提取法比乙醇提取法提取率高,但乙醇提取法在纯化过程中更方便。水提取法的最佳工艺参数为：料液比1∶10的沸水直接提取,提取时间40min。乙醇提取法的最佳工艺参数为∶乙醇浓度60%、料液比1∶6、提取温度85℃、提取时间50min。用高效液相色谱法对水提取物和乙醇提取物进行了检测,测定了两种提取物中存在苦杏仁苷。     

玉米半胱氨酸蛋白酶突变体W308C的原核表达和酶学性质表征

通过对玉米半胱氨酸蛋白酶（cysteine protease from Zea mays,zmCP1）同源模建和底物对接研究发现,W308位点在木瓜蛋白酶家族（C1家族）高度保守,且位于zmCP1催化三联体残基N306位点附近,与绝大多数底物形成π-π键,可参与底物和酶活性中心的结合,是该酶的关键位点;结合Rosetta design程序设计,对W308位点进行突变,获得W308C突变体,并在大肠杆菌BL21中表达。酶学性质表征实验结果表明：突变体W308C的最适温度为55 ℃,最适pH 6.0;在70、80、90 ℃下的半衰期为75.33、57.24、40.29 min,分别是野生型的1.21、1.19、1.01倍;突变体W308C和野生型的特异性常数Kcat/Km分别为11.02、5.92 L/（μmol·min）,催化活性提高了0.86倍。     

天冬氨酸激酶突变体G277K中AK基因的克隆表达及酶学性质表征

通过序列比对和晶体结构分析发现,天冬氨酸激酶（aspartokinase,AK）的G277位点高度保守,并与抑制剂Thr通过氢键相连,对其进行定点突变和酶学性质表征。结果表明：突变体G277K的AK最适反应条件是30 ℃、pH 8.5;动力学实验结果显示突变体AK的正协同效应降低,趋向于米氏酶,参数S0.5、nH、酶比活力、Vmax分别是7.05 mmol/L,1.24、964.3 U/mg、32.143 U/（mg·min）;热稳定性实验显示,其30 ℃半衰期为2.3 h,3 h后酶活力丧失80%左右;Ni2+在低浓度时表现出显著的激活效应;有机溶剂丙三醇、异丙醇和二甲基亚砜的体积分数为1%时,对AK的酶活力有很好的激活作用,表明突变体AK对一些有机溶剂有一定的抗性;低浓度的赖氨酸和蛋氨酸对AK有激活作用。     

抗菌肽Japonicin Ⅱ基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达

采用重叠区基因扩增法(SOE)人工设计和合成抗菌肽JaponicinⅡ基因.按正确的阅读框架定向克隆至真核表达载体pPlCZαA上,构建出的重组质粒pPICZaA-Jap,经电击法转至GSll5宿主菌,Zeocin筛选的阳性克隆用甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE确定了产物的正确性:利用琼脂孔穴扩散法证明了表达产物具有抗菌活性.     

牛乳中主要过敏原组分的分离纯化

本文采用硫酸铵分级沉淀法和等电点沉淀法来提取牛乳中的主要过敏原酪蛋白组分,通过SDS-聚丙烯酰胺电泳检测发现,酪蛋白分离最佳条件是：pH值4.6、温度55℃。     

玉米多肽制备工艺的优化

采用碱性蛋白酶水解玉米蛋白为玉米多肽,对影响碱性蛋白酶水解玉米蛋白的主要因素进行了探讨,通过单因素分析和正交试验筛选出最佳工艺参数。研究结果表明：酶水解玉米蛋白的最佳条件为：pH值9.0、底物浓度[S]5.0%、酶底物浓度比（E/S）3.0%、水解温度50℃、水解时间1h。     

抗菌肽Taponicin Ⅱ基因真核表达载体的构建

采用SOE法人工设计和合成抗菌肽Japonicin Ⅱ基因.按正确的阅读框架定向克隆至真核表达载体pPICZαA上,经PCR鉴定及序列分析,所转化的毕赤酵母GS115中含有插入Japonicin Ⅱ基因的重组质粒pPICZαA-Jap,结果表明成功构建了抗菌肽JaponicinⅡ基因真核表达载体pPICZαA-Jap.     

多元复合抗性淀粉减肥功效评价

为了研究多元复合抗性淀粉对饮食诱导肥胖小鼠减肥的作用机制,通过建立饮食诱导肥胖小鼠模型对肥胖小鼠进行分组灌胃,记录试验期间小鼠的体质量及摄食量变化,试验结束后采集血清并用试剂盒测定相关指标:总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、瘦素(Leptin,LP)、低密...