大肠杆菌中可溶性表达重组人成纤维细胞生长因子21及制备

为在大肠杆菌中高效、非融合、可溶性表达重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF-21),研究了纯化方法,以获得具有较高生物活性的rhFGF-21。全基因合成人成纤维细胞生长因子21cDNA序列,克隆进原核表达载体pET-3c,在转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中进行表达。表达产物经盐析、层析等方法纯化后,利用3T3-L1细胞鉴定其促葡萄糖摄取的生物学活性。结果表明:rhFGF-21在BL21(DE3)PlysS实现了高效、非融合、可溶性表达,目的蛋白占菌体总蛋白的20%左右;表达产物经纯化后,纯度可达95%以上;表达产物能够明显促进3T3-L1细胞对葡萄糖的吸收。该方法成功实现了rhFGF-21在大肠杆菌中高效可溶性表达。     

RP-HPLC法测定血浆中聚乙二醇尿酸酶浓度的方法

建立一种快速、稳定、灵敏度高的测定血浆中聚乙二醇尿酸酶浓度的高效液相色谱方法。将血浆样品与尿酸反应5 min,加入高氯酸终止,经高速离心,取上清液20μL检测。色谱柱采用Waters symmetry C18（4.6×250 mm,5μm）,流动相为磷酸-甲醇-超纯水（3∶10∶487）,流速1.0 mL/min,检测波长293 nm。通过体系中尿酸的降低值间接测定血浆中聚乙二醇尿酸酶的浓度。结果表明,聚乙二醇尿酸酶在31.25 ng/mL~20μg/mL范围内呈线性关系,r=0.999 4,日内、日间精密度均小于10%,回收率在88%~105%。