流式细胞术快速检测杆状病毒滴度

为了快速而准确的测定杆状病毒的滴度,采用流式细胞术对经SYBR Green I染色后的杆状病毒直接计数.考察固定、破膜和染色等因素对检测结果的影响,并验证改进后的方法的重复性和线性性.杆状病毒最佳染色条件:质量分数为0.1%的多聚甲醛固定病毒30 min后,加入一定量的SYBR Green I在80℃下孵育10 min.测量结果CV值为2.4%(n=8),R2为0.999 8.整个测量过程由原来终点稀释法的7～10 d缩短到1 h.     

重组杆状病毒感染悬浮昆虫细胞感染策略优化及扩大试验

昆虫细胞-杆状病毒表达系统已经广泛应用于生物杀虫剂及重组蛋白的大规模生产。在昆虫细胞-杆状病毒表达系统中,感染策略中的感染复数(MOI)、感染时间(TOI)、细胞初始浓度(ICD)的相互关系还不是很清楚,而且相关报道也很少。本研究在摇瓶中利用正交实验探讨了MOI、TOI及ICD的相互作用关系以及对包涵体病毒(OV)和非包涵体病毒(BV)产量的影响。结果表明,感染复数对OV和BV产量有显著的影响;最佳感染条件为MOI为0.1,TOI为细胞处于对数生长期初期,ICD为2×105cells.ml-1;最大BV病毒滴度为2.0×107TCID50.ml-1。将在摇瓶中获得的最佳条件在气升式反应器进行扩大试验,获得最大病毒滴度为2.13×107TCID50.ml-1。     

不同周期Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活的研究

为了研究不同周期Sf9细胞线粒体琥珀酸脱氢酶酶活的差异,首先使用TdR(胸腺嘧啶核苷)双阻断法将Sf9细胞同步化于G1/S期,恢复生长分别得到S、G2/M、G1期的细胞,然后利用MTT法检测不同细胞周期的Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活,发现处于G1期的细胞酶活比S、G2/M期的细胞酶活大.跟踪细胞成长,在不同的时间点采样,以MTT法检测琥珀酸脱氢酶酶活,发现接种后48 h的Sf9细胞酶活最大,此时与其他时刻相比的Sf9细胞处于G1、S期所占的比例最大.     

不同周期Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活的研究

为了研究不同周期S19细胞线粒体琥珀酸脱氢酶酶活的差异,首先使用TdR（胸腺嘧啶核苷）双阻断法将Sf9细胞同步化于G1／S期,恢复生长分别得到S、G2／M、G1期的细胞,然后利用MTT法检测不同细胞周期的Sf9细胞琥珀酸脱氢酶酶活,发现处于G1期的细胞酶活比S、G2／M期的细胞酶活大．跟踪细胞成长,在不同的时间点采样,以MTT法检测琥珀酸脱氢酶酶活,发现接种后48h的Sf9细胞酶活最大,此时与其他时刻相比的S19细胞处于G1、S期所占的比例最大．     

流式细胞术快速检测杆状病毒滴度

为了快速而准确的测定杆状病毒的滴度,采用流式细胞术对经SYBR Green I染色后的杆状病毒直接计数．考察固定、破膜和染色等因素对检测结果的影响,并验证改进后的方法的重复性和线性性．杆状病毒最佳染色条件：质量分数为0．1％的多聚甲醛固定病毒30min后,加入一定量的SYBR Green I在80℃下孵育10min．测量结果CV值为2．4％（n=8）,R^2为0．9998．整个测量过程由原来终点稀释法的7～10d缩短到1h．