仿刺参过氧化氢酶的理化性质

利用重组工程菌BL21(DE3)/pET-28c-Aj-CAT外源表达了具有抗氧化活性的重组仿刺参过氧化氢酶(rAj-CAT)。重组rAj-CAT在405 nm处具有一个特征峰谱,且该峰谱不受Na₂S₂O₄的影响。典型的过氧化氢酶抑制剂如3-氨基-1,2,4-三唑、盐酸羟胺和叠氮化钠对rAj-CAT具有显著抑制作用。结果表明,此海参种属的过氧化氢酶属于典型的单功能过氧化氢酶。对重组rAj-CAT蛋白的最适酶活条件进行检测,确定rAj-CAT在较低温度范围(4～30℃)都具有降解H₂O₂的作用,最适酶活温度为10℃;rAj-CAT具有较宽的pH耐受范围,在pH 4.0～11.0都具有催化活性;rAj-CAT也能耐受多种金属离子和化学物质,包括Triton X-100、吐温20和EDTA;但DTT、β-ME、SDS、胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶对rAj-CAT水解H₂O₂的活性具有较强的破坏作用。结果表明,海参种属的Aj-CAT是一种能够在较低...     

仿刺参过氧化氢酶的克隆、表达及纯化

采用RT-PCR技术从仿刺参肠道组织中克隆了过氧化氢酶(Aj-CAT)蛋白的编码序列(CDS)。通过PCR扩增,成功构建了含有Aj-CAT编码序列的重组表达载体pET28c-Aj-CAT。通过热激法获得用于外源表达仿刺参过氧化氢酶蛋白的基因工程菌株BL21(DE3)/pET28c-Aj-CAT。IPTG诱导后,SDS-PAGE检测发现,基因工程菌能够在体外成功地表达融溶状态的仿刺参过氧化氢酶蛋白。利用镍离子亲和层析柱分离纯化,经200 mmol/L咪唑洗脱后,成功得到纯度为97.6%、能够清除过氧化氢的Aj-CAT蛋白。     

一株广谱抗菌甲基营养型芽孢杆菌的筛选及其产抗菌脂肽的鉴定

利用琼脂扩散法和牛津杯法,从大连市仿刺参养殖圈海水中分离筛选出1株具有广谱抑菌作用的细菌.经过16S rDNA测序比对,鉴定其属于甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus),命名为B.methylotrophicus 6112.通过B.methylotrophicus 6112发酵液对3种指示菌的抗生物膜作用,初步断定菌株能代谢产生抗菌脂肽类物质.利用酸沉法对Bacillus methylotrophicus菌株发酵液中的抗菌肽进行粗分离,获得了具有抑菌活性的粗提物.利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱通过检测酸沉粗提物的相对分子质量,经过比对分析,确定菌株Bacillus methylotrophicus能够产生3种抗菌脂肽类物质,分别是伊枯草菌素、芬荠素和杆菌霉素.