Vero细胞法测定白喉类毒素效价方法的建立

近年来,WHO已推荐用Vero细胞法代替经典的动物体内法,体外测定白喉抗体。为使我国的检定规程与WHO接轨,并配合上海、兰州两条DPT生产线通过世行的验收（其中白抗的测定要求使用Vero细胞法）,我们建立了Vero细胞法以测定白喉类毒素效价,并从不同方面验证了本方法的重复性与可靠性。1．实验的重复性格国家标准品与待检品DPT的免疫剂量进行3次试验,每个剂量的反应值见表1,从中可见3次试验中国家标准品结果一致,DPTI及DppZ因其本身效价不同而反应值可见差异,而Dppl的2次试验中反应值一致,第一次测定效价为452IU／nil,第二…     

吸附精制白喉—破伤风二联类毒素成人接种后的血清学效果

本文报告用两种配方的吸附精制白喉—破伤风二联类毒素(DT),在浙江省黄岩县中学生和青工中进行免疫效果观察。免疫后1个月、 1年和3年白喉抗体保护水平分别达95％、88％和80％以上。免疫后1个月和1年破伤风抗体保护水平分别达85％和81％以上。白喉和破伤风免疫后抗体滴度的几何平均值(GMT)分别比免疫前增加4～28倍和7～11倍。表明该制剂接种1次即可获得较为满意的血清学效果,可供青少年和成人作加强免疫或应急接种用。     

重组人胰高血糖素类多肽-1(7-36)对正常动物降糖作用的实验研究

目的 观察rhGLP-1(7-36) 对正常动物的降血糖和促胰岛素分泌作用以及该作用的葡萄糖依赖性。 方法 用不同动物模型sc 不同剂量的rhGLP-1(7-36) 后, 收集血清, 测定血糖值及胰岛素值。 结果 正常C57 小鼠和家兔sc 不同剂量的rhGLP-1(7-36) 后, 血糖和胰岛素分泌均无明显改变, 提示rh-GLP-1(7-36) 并不影响血糖正常动物的胰岛素分泌及血糖;对于给糖负荷动物, rhGLP-1(7-36) 使其胰岛素分泌增加, 并进而使升高的血糖明显降低, 表明rhGLP-1(7-36) 具有明显的葡萄糖依赖的促胰岛素分泌作用。在C57 小鼠和家兔糖耐量实验中发现, rh-GLP-1(7-36) 16 μg·kg-1使糖负荷家兔胰岛素分泌增加, 血糖升高曲线明显降低, 说明rhGLP-1(7-36) 能明显增加动物对糖的耐受。 结论 rhGLP-1(7-36) 通过葡萄糖依赖的胰岛素分泌作用降低过高血糖, 而不降低正常血糖, 同时用量小, 起效快, 安全性高。     

海狗油保肝作用的实验研究

目的: 观察海狗油对化学毒物所致小鼠、大鼠急性肝损伤及对长期喂食高脂饲料大鼠的影响。方法: 实验分为6 组(n = 10):即空白组、模型组、阳性药组、海狗油低、中、高剂量组。 化学毒物乙硫氨酸或四氯化碳致急性肝损伤实验:小鼠和大鼠各组分别灌胃(ig)给供试药9d或7d;d 7 ig DL-乙硫氨酸,实验结束时测定肝脂:d6 ip四氯化碳,实验结束时 测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和组织学检查。 长期喂食高脂饲料大鼠实验:于实验d1 一次性皮下注射小剂量四氯化石桌并长期喂食高脂饲料造成脂肪肝模型大鼠,同时各组分别ig供试药, 每天1次,连续10周后,称肝脏重量并计算肝脏系数,测定血脂、肝脂、脂质过氧化指标和组织学检查。结果: 对乙硫氨酸致急性肝损伤的小鼠和大鼠ig 给予海狗油(小鼠7.2g·kg^-1,大鼠4.8g·kg^-1)后,与模型组比较甘油三酣(TG)分别降低23%和16%(P < 0. 01);对四氯化碳致急性肝损伤的大鼠,海狗油4. 8 mg·kg^-1组使ALT降低24%(P<0.01)、AST降低16%(P < 0.01)。 长期喂食高脂饲料大鼠,与模型组比较,海狗油 4.8mg·kg^-1组血清总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、肝重量及肝细胞内 TG、FFA 和丙二醒(MDA)含量显著降低(P < 0.01), 超氧化物歧化酶(SOD)活性升高(P<0.01),组织学检查显示肝细胞内脂变程度减轻,脂滴减少。结论: 海狗油对化学毒物所致急性肝损伤的肝细胞有保护作用,对脂肪肝的形成具有明显的预防作用。     

海狗油对非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1表达及与氧化抗氧化关系的影响

目的: 研究海狗油对非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1表达及与氧化抗氧化关系的影响。方法: 于实验d 1 一次性皮下注射小剂量四氯化碳并长期喂食高脂饲料复制大鼠脂肪肝模型,7 周后,开始分别口服灌胃(ig)给予模型组等体积橄榄油,阳性药辛伐他汀4mg·kg^-1,海狗油各组ig 海狗油0.5、1.6和4.8g·kg^-1,每天1次,连续8周。观察肝组织病理形态的变化和肝细胞色素P450 2E1的表达;测定血清和肝内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)以及游离脂肪酸(FFA)含量的变化。结果: 与脂肪肝模型组比较,海狗油不同给药组病理切片苏丹Ⅲ染色和HE 染色显示肝细胞的脂变程度明显减轻,脂滴减少,免疫组化证明肝细胞色素P450 2E1表达受到不同程度的抑制,同时血清及肝内MDA、FFA显著降低,SOD活性升高。在模型组和各给药组不同的肝组织内,CYP2E1的表达强度及分布的方式存在着差异。结论: 海狗油能显著抑制大鼠脂肪肝CYP2E1的表达,减轻脂质过氧化反应。动物个体间存在CYP2E1多态性。     

破伤风毒素及其片段的免疫效果

本文首次报道了破伤风毒素及其片段和片段组合对小鼠的免疫效果。通过凝胶过滤和离子交换等方法提纯了破伤风毒素及其片段。各片段中残余素素的污染率为0～0.8%。将各片段给小鼠免疫均能诱导产生保护性抗体,用破伤风毒素攻击后能使部分小鼠免于死亡。当免疫小鼠的血清抗体滴度>1∶4(0.01HAU/ml)时,小鼠在毒素攻击后一般可免于死亡,当血清抗体滴度>1∶128(0.5HAU/ml)时,则小鼠经攻毒后一般不表现出任何中毒症状,当血清抗体滴度处于二者之间时,小鼠一般表现有破伤风中毒症状,但大部分可以存活。毒素的三个片段均能诱导产生保护性抗体,但存在着明显的差别。     

正交实验建立蛇毒抗瘤蛋白生物活性测定方法

目的: 建立蛇毒抗瘤蛋白生物活性测定方法。方法: 用正交实验确定实验条件, 求细胞 50%死亡时的样品浓度, 即 IC 50 值。结果: 此法使细胞死亡率与样品 的 Log 浓 度具 有良好 的线 性关 系 (r =0.9515, P <0.01), 重复性实验结果:板内 RSD 值为12.3%, 板间 RSD 值为 16.6%;不同实验次数 RSD值为 17.8%, 灵敏度为 36 μg°L^-1, 并能反应出蛇毒抗瘤蛋白的抗肿瘤特异性。结论: 此方法特异, 简便且具有良好的重复性, 可以作为蛇毒抗瘤蛋白生物活性的测定方法。