吸附精制百白破混合制剂Ⅲ期临床反应观察

根据卫生部药政发（94）第530号文精神及卫生部（93）S－59号新生物制品批件要求，由广州市卫生防疫站、中国药品生物制品检定所等单位对卫生部生物制品总公司协作组、长春等5个生研所试生产的吸附精制百白破混合制剂（APDT）进行了回期临床反应观察。旨在通过本次大规模的婴幼儿人群接种反应观察，了解该制剂有无严重异常反应发生及其发生率，以便对该制剂的安全性作出进一步评价，为该制剂获取正式生产文号以及在全国范围内推广应用提供新的科学依据。观察于1995年4月开始，到1996年8月底为止，为期1年4个月，在广州市8个区（市）中进行…     

百日咳黏附素的原核表达及其单克隆抗体的制备

目的原核表达百日咳黏附素(Pertactin,Prn),并制备抗Prn单克隆抗体。方法从无细胞百日咳疫苗生产菌株CS株基因组DNA中克隆Prn基因,插入表达载体pQE-30中,构建重组表达质粒pQE-30-Prn,转化E.coli M15,IPTG诱导表达。表达的重组Prn蛋白经阳、阴离子交换层析纯化后,采用Western blot和ELISA法鉴定重组Prn蛋白的反应原性。以纯化的重组Prn蛋白为免疫原,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并对制备的单抗进行鉴定。结果重组表达质粒经双酶切和测序鉴定构建正确;表达的重组Prn蛋白相对分子质量约为69 000,主要以包涵体形式表达;纯化的重组Prn蛋白的纯度达95%以上,产量可达25 mg/L,能与不同来源的抗Prn-Ab血清特异性结合。获得2株分泌抗Prn单抗的杂交瘤细胞株,分泌的单抗均为IgG1类,轻链类型均为κ,效价均达1∶105以上,并能特异性识别Prn蛋白,而与百日咳杆菌其他抗原蛋白无交叉反应。结论原核表达、纯化了重组Prn蛋白,并制备了2株效价高、特异性强的单抗,为无细胞百日咳疫苗的质量控制及百日咳杆菌致病机制的研究提供了材料。     

抗百日咳丝状血凝素单克隆抗体的制备、鉴定及应用

目的制备抗百日咳丝状血凝素(FHA)的单克隆抗体,并建立特异、准确的FHA定量检测方法。方法采用杂交瘤技术制备McAb,以ELISA间接法筛选稳定分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,并进行系统的鉴定和纯化,建立定量检测FHA的ELISA方法。结果获得6株分泌抗FHA-McAb的杂交瘤细胞株,抗体类别均为IgG1(κ),效价达1∶105~1∶106,并能特异性识别FHA,与流感病毒血凝素及百日咳毒素无交叉反应,应用ELISA检测FHA的灵敏度为1.04μg/L,批内变异系数为5.49%,批间变异系数为9.31%,平均回收率为94.18%。结论已成功制备了抗FHA-McA,建立了一种特异、准确地定量检测FHA的ELISA方法,可用于无细胞百日咳疫苗原液中FHA含量的检测,为该疫苗的质量控制提供了有力的手段。     

白喉类毒素残余毒性检测新方法的建立

目的建立检测联合疫苗中白喉类毒素残余毒性的新方法,以替代现有的家兔皮肤试验法。方法采用Vero细胞法检测白喉类毒素的残余毒性,对该方法的特异性、灵敏度(最低检测限)和重复性进行验证,并对Vero细胞法与家兔皮肤试验法测定白喉类毒素残余毒性的结果进行比较。结果 Vero细胞可特异性检测白喉类毒素的残余毒力,该方法的最低检出限为10-8 LD50白喉毒素,重复性良好,灵敏度比家兔皮肤试验法高10 000倍。结论 Vero细胞法可用于白喉类毒素残余毒性检查和毒性逆转检查,该方法特异性强,灵敏度高于家兔皮肤试验法,适用于以白喉、破伤风为基础的联合疫苗(DT-based combined vaccines,DT combos)的安全性评价。     

表面网格控制的快速毛发建模

针对现有角色毛发建模复杂耗时的问题,提出一种基于多边形表面网格的快速毛发建模方法.首先构建粗糙的表面网格来大致表示毛发的整体形态,随后计算控制毛发走向的参数,并基于此自动生成形状网格对应的空间毛发轨迹线来修正毛发走向,使结果在拟合用户指定的毛发形态的同时兼容现有的风格化方法.实验结果表明,该方法使用类似表面网格建模的方法即可完成高质量毛发的建模,在得到较好结果的同时大大降低了建模的难度与工作量,并增强对结果的可控性.另外,文中方法也可方便地与基于物理的运动模拟方法结合生成毛发动画.     

第三批百日咳疫苗效力国家参考品的稳定性

第三批百日咳疫苗效力国家参考品（参苗＃３）是在１９８０年由中国药品生物制品检定所与长春生物制品研究所合作,制备并冻干而建立的。其效力单位经与ＷＨＯ的＃２、我国的＃２百日咳效力参考品标化,经过统计学处理得到其所标定的每安瓿１８个国际效力单位（ＩＵ／安瓿）。到目前为止,该批参考品从冻干之日起已有近２０年,为此,我们对该批百日咳疫苗效力国家参考品的稳定性进行了分析和研究。 第三批百日咳疫苗效力国家参考品在不同年代和不同的半数致死量（ＬＤ５０）攻击的条件下,按照中国生物制品规程（１９９５年版）规定的百日…     

用无细胞百日咳抗原配制的吸附精制百白破制剂的特性和人群反应及血清学效果

用50L发酵罐培养百日咳菌,经硫酸铵盐析法提取保护性抗原,戊二醛解毒后,与白喉、破伤风类毒素及Al(OH)_3配合制成的吸附精制百白破制剂(APDT),质量符合规程要求。给3～5月龄婴幼儿接种后全身和局部副反应很低,与现行吸附百白破制剂(WPDT)有非常显著性差异。免后血清中抗-PT和抗-FHA抗体均有显著增长,与WPDT制剂组相比,APDT的抗-PT和抗-FHA抗体增长更为显著。APDT免后抗白喉、抗破伤风抗体滴度均超过保护水平。本制剂的质量及免疫效果均达到了国外同类产品水平。     

金黄葡萄球菌肠毒素C2对小鼠移植瘤的抑制作用

目的采用小鼠移植瘤模型,对金黄葡萄球菌肠毒素C2的抗肿瘤作用进行研究,以进一步揭示超抗原在肿瘤治疗方面的意义。方法从金葡菌发酵液中提纯SEC2蛋白,并经SDS-PAGE及测序分析;构建小鼠S180肉瘤和Lewis肺癌移植瘤模型,分别腹腔注射高、中、低剂量(800、400、200 ng/kg)的SEC2,连续给药10 d,同时以环磷酰胺为阳性对照,生理盐水为阴性对照。于给药后第11天处死小鼠,将肿瘤组织分离并称重,比较SEC2对S180肉瘤及Lewis肺癌移植瘤的抑瘤效果。结果在相对分子质量约30 000处可见目的条带,与理论值相符,N-未端氨基酸测序与文献报道一致;SEC2对两种移植瘤均产生较明显抑制作用,高、中、低剂量SEC2对S180肉瘤的抑瘤率分别达到50.60%、31.81%和19.38%,对Lewis肺癌的抑瘤率分别达到55.62%、45.70%和37.78%。结论从动物水平上确认了SEC2的抑瘤效果,为进一步开展超抗原抗肿瘤研究奠定了基础。     

无细胞百日咳疫苗效力国家参考品的建立

采用罐培养百日咳CS菌株,培养物经硫酸铵两段盐析、浸提后,再经蔗糖密度梯度离心,收集以FHA．PT为主的百日咳菌保护性抗原,经福尔马林解毒,制备成原液。该原液按照中国和日本的生物制品规程检定合格后,加入保护剂,稀释至18μgPN／ml,分装冻干制备成无细胞百日咳疫苗效力参考品。以JNIH3和JNIH－6参考品为标准,按照日本规程的小鼠脑腔攻击法标定其效力单位。根据14次效力试验所得的结果和日本NIH标定的结果,该批疫苗效力国家参考品的效力单位定为15PIU／ml。     

无细胞百白破疫苗加强免疫一年后的血清抗体水平

用无细胞百白破疫苗（DTPa）和全细胞百白破疫苗（DTPw）分别进行基础免疫，再用DTPa或DTPw加强免疫，一年后对免疫儿童进行了血清抗体检测。结果各类抗体均较加强免疫后一个月明显下降，3个组中抗—FHA虽有所下降，但均在保护水平以上（＞20EU／ml），抗—PT抗体只有DTPa组大于20EU／ml。3个组中的大多数儿童的百日咳凝集抗体均＜1：320，而抗白喉类毒素（抗—DT）、抗破伤风类毒素（抗—TT）抗体均在保护水平以上。