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Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白基因的克隆和原核表达 总被引：1，自引：1，他引：1
目的重组表达Ⅱ型B族链球菌表面免疫相关蛋白(Surfaceimmunogenicprotein,SIP)基因,为进一步免疫学研究提供目标蛋白。方法用PCR的方法从GBSⅡ型标准株的基因组DNA中扩增出SIP基因,用T/A克隆法将其插入pMD18T载体,构建原核表达载体pET32aSIP,用BL21(DE3)/pET系统表达TrixSIP融合蛋白,SDSPAGE和质谱分析鉴定表达产物,并对表达蛋白进行初步纯化。结果PCR扩增产物经测序,证实与GenBank中Ⅰa/c型GBS的SIP的基因序列同源性为99%。SDSPAGE显示,经IPTG诱导后BL21(DE3)/pET32aSIP总蛋白中出现一条相对分子质量为66000的新蛋白带。质谱分析和蛋白质库的比较证实其为B族链球菌表面免疫相关蛋白(SIP)的可能性分数为74。结论已成功表达并初步纯化SIP,为SIP在细菌致病中的作用研究以及相关疫苗的制备奠定了基础。 相似文献
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目的制备6C型肺炎链球菌抗血清,并进行鉴定。方法将经美国单克隆抗体方法鉴定为6C型的肺炎链球菌制成菌体抗原免疫家兔,制备抗血清;将抗血清与6A、6B和6C型肺炎链球菌进行荚膜肿胀和凝集试验;用6A、6B及6A和6B型肺炎链球菌吸附血清后,再次检测其与各型肺炎链球菌的凝集效价。结果免疫前的兔血清与6A、6B和6C型肺炎链球菌均未出现荚膜肿胀及凝集反应。免疫后的血清与6A、6B和6C型的凝集效价分别为1∶64、1∶32和1∶64;经6A或6A和6B型吸附后,与6A、6B和6C型的凝集效价分别为(-)、(-)和1∶8;经6B型吸附后,与6A、6B和6C型的凝集效价分别为1∶16、(-)和1∶16。结论6C型为新的肺炎链球菌血清型,已成功制备出6C型抗血清,可用于血清分型研究。 相似文献
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