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目的筛选扩增培养前后脐血CD34+细胞差异表达基因。方法将新鲜分离的CD34+细胞设为对照组,经静态和动态培养系统扩增的CD34+细胞设为试验组,应用基因差异显示技术(DDRT-PCR)比较两组之间的基因表达差异,对差异表达基因片段进行克隆、测序及生物信息学分析,并且通过半定量RT-PCR方法验证基因差异表达的真实性。结果应用差异显示技术筛选出5个差异表达基因,其中4个为已知功能基因,1个为未知功能基因,对其中2个基因RAN和DC24进行半定量RT-PCR检测表明,在静态和动态体系扩增培养后的CD34+细胞内,RANmRNA的表达水平分别是新鲜分离细胞的1.521和3.978倍,DC24mRNA的表达水平分别是新鲜分离CD34+细胞的14.275和2.374倍。结论发现了与CD34+细胞体外增殖相关的一些重要基因,为从基因水平调控CD34+细胞体外增殖提供依据。 相似文献
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目的研究体外培养环境对脐血CD34+造血干/祖细胞基因表达的影响。方法脐血单个核细胞(MNC)在静态和动态培养系统中培养7d后,收集CD34+造血干/祖细胞,利用SMART-PCR技术从少量RNA中扩增cDNA用于标记探针,与基因芯片杂交后分析培养前后以及不同培养模式下培养的CD34+造血干/祖细胞基因表达的差异。结果在所检测的588个基因中,45个基因在培养前后的CD34+造血干/祖细胞中差异表达,其中20个基因在培养后表达上调,25个基因表达下调。另外,12个基因在不同培养模式中差异表达,只有CCL2在动态培养中高表达,而其余11个基因均在静态培养中高表达。结论通过分析体外培养环境对CD34+造血干/祖细胞基因表达的影响,可以在分子水平上理解CD34+造血干/祖细胞对培养环境的生理响应。 相似文献
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