人松弛素H2类似物在毕赤酵母中的高效表达及其活性

目的利用毕赤酵母表达系统高效分泌表达人松弛素H2类似物(Human relaxin-2 analogue,HR2),并检测其生物活性。方法通过密码子优化合成HR2基因,构建重组表达质粒pPICZαA-HR2,转化毕赤酵母菌GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析。表达产物经超滤和柱层析纯化后,切除人工C肽,检测其生物活性。结果经双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pPICZαA-HR2构建正确;Tricine-SDS-PAGE分析显示,表达的重组蛋白相对分子质量约6 500,表达量占菌体总蛋白的47.6%,为451μg/ml,且为分泌表达;Western blot分析显示,重组蛋白具有良好的反应原性;纯化的重组蛋白纯度达96%;经检测C肽切除的重组HR2对THP-1细胞具有刺激活性。结论成功在毕赤酵母GS115中高效分泌表达了重组松弛素H2类似物,并具有一定的生物活性。     

17-烯丙氨基格尔德霉素体内外抗肿瘤作用研究

目的 研究17-烯丙氨基格尔德霉素的体内外抗肿瘤作用.方法 MTT法评价17-烯丙氨基格尔德霉素对人肿瘤细胞株的体外抑制作用;荷瘤小鼠静脉注射20,40,80 mg/kg剂量的17-烯丙氨基格尔德霉素,观察小鼠对异种移植实体瘤、腹水瘤及P388白血病的抗肿瘤作用.结果 17-烯丙氨基格尔德霉素对人小细胞肺癌细胞、BEL-7402肝癌细胞、MCF7乳腺癌细胞均有明显抑制作用,可明显抑制皮下移植的S180肉瘤、Lewis肺癌、B16黑色素瘤的生长,并明显延长EAC腹水瘤、H22肝癌腹水瘤、P388白血病小鼠的生存时间.结论 17-烯丙氨基格尔德霉素具有显著的体内外抗肿瘤作用.     

重组人粒细胞集落刺激因子对食物中毒致白细胞减少症的试验治疗

目的T-2毒素是最常见的食物中毒毒素之一,它可致严重的中毒症状,如呕吐、腹泻、造血组织损伤等。为探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对食物中毒致模型动物白细胞(WBC)减少症的有效性,对以T-2毒素中毒致WBC减少症的模型进行了研究。方法以猫为受试动物,设rhG-CSF30μg/kg、150μg/kg给药组(s.c.,×7次)和模型对照组,各组T-2毒素隔日给药1次,至WBC减少至30%为止。测定给药后动物体重、主要脏器系数、血常规等。结果rhG-CSF给药后可明显减轻中毒症状和改善造血机能。结论rhG-CSF对食物中毒致WBC减少症有效。     

17-烯丙氨基格尔德霉素体内外抗肿瘤作用研究

目的研究17-烯丙氨基格尔德霉素的体内外抗肿瘤作用。方法 MTT法评价17-烯丙氨基格尔德霉素对人肿瘤细胞株的体外抑制作用;荷瘤小鼠静脉注射20,40,80 mg/kg剂量的17-烯丙氨基格尔德霉素,观察小鼠对异种移植实体瘤、腹水瘤及P388白血病的抗肿瘤作用。结果 17-烯丙氨基格尔德霉素对人小细胞肺癌细胞、BEL-7402肝癌细胞、MCF7乳腺癌细胞均有明显抑制作用,可明显抑制皮下移植的S180肉瘤、Lewis肺癌、B16黑色素瘤的生长,并明显延长EAC腹水瘤、H22肝癌腹水瘤、P388白血病小鼠的生存时间。结论 17-烯丙氨基格尔德霉素具有显著的体内外抗肿瘤作用。     

重组蛋氨酸酶在猕猴体内的药动学、免疫原性及系统毒性

目的重组蛋氨酸酶(rMETase)对于人系外源性蛋白酶,该酶在人肿瘤裸鼠模型中表现出广泛的抑瘤作用。本实验以灵长类动物猕猴为研究对象,测定了rMETase的药动学、免疫原性及系统毒性。方法与结果rMETase单次静脉注射1000u/kg、2000u/kg和4000u/kg时,猕猴血浆蛋氨酸水平在30min内可降低至无法检测的水平(小于0.5μmol/L),且持续4h;给药剂量4000u/kg时,血浆蛋氨酸低于1μmol/L的水平,可维持8h。rMETase在猕猴体内的t1/2为2.49h,给药2000u/kg和4000u/kg时的CL分别为11.28ml/h和30.77ml/h;rMETase以4000u/(kg.8h)重复给药2周时,可使血浆蛋氨酸水平在给药期间维持在2μmol/L以下;重复大剂量给药的主要系统毒性表现为食量减少、体重轻微下降,血浆白蛋白和红细胞水平呈可逆性降低。当rMETase重复给药2周后的28d再次给药时,出现过敏性休克,其中有1只动物死亡;及时给予激素抢救可避免死亡,或给药前给予氢化可的松可预防过敏性休克发生。在实验后的66、86和116d时再次给药,首次给药后抗rMETase抗体水平为10-3,第4次给药后增加到10-6;在以后的2个月内抗体水平降低至10-2。抗rMETase抗体类型主要是IgG,体外检测系中和性抗体;但在体内对rMETase降低血浆蛋氨酸作用的影响较小。结论系统研究表明,rMETase在猕猴模型中能有效地降低血浆中蛋氨酸水平,出现的系统毒性反应很小;rMETase是一具良好前景的广谱抗肿瘤新药,但应重视其免疫原性,如能进行化学修饰或其它处理则可增加药物的作用时间并降低其免疫原性,增加用药安全性。     

重组瑞替普酶对体内诱发形成血栓的快速溶栓作用

目的建立以胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成与角叉菜胶诱发大鼠尾部血栓形成模型,评价重组瑞替普酶(Reteplase)对体内诱发血栓形成的快速溶栓作用,为临床应用提供依据。方法将Reteplase与诱导剂混匀后给小鼠作尾静脉注射,观察给药后5min内小鼠死亡数和15min内小鼠偏瘫恢复数,计算药物对小鼠形成脑血栓的保护率;大鼠足跖皮下注射角叉菜胶使尾部形成血栓后给药,观察血栓平均长度及再通率。结果Reteplase对胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓有迅速溶栓、急救效应;对角叉菜胶诱发大鼠尾部混合血栓有显著溶栓作用。结论溶栓作用呈现明显的剂量-效应关系。本文首次报道了Reteplase对体内诱发血栓的溶栓作用。     

芦荟通便作用的研究进展

芦荟是一种集药用、食用、美容和观赏于一体的重要经济植物,以其独特的功效和广泛的用途受到国内外的重视。研究芦荟的文献也较多,现将近年芦荟通便作用的研究进展作一综述。     

复方制剂中头孢哌酮与他唑巴坦在犬体内药动学的相互影响

目的考察不同给药剂量的头孢哌酮(CFP)/他唑巴坦(TAZ)复方制剂(简称CFP/TAZ)中CFP与TAZ在犬体内药动学行为及相互影响。方法取Beagle犬4只,单次静脉注射CFP(110mg/kg)、TAZ(56mg/kg)及3种不同剂量(31mg/kg、125mg/kg、500mg/kg)的CFP/TAZ,RP-HPLC测定其血药浓度,拟合药动学曲线及计算药动学主要参数。结果单次静脉注射CFP、TAZ及CFP/TAZ在Beagle犬体内的处置都符合二室模型。单次静脉注射CFP与等剂量CFP/TAZ中CFP的血药浓度方差分析无差异,与3种不同剂量CFP/TAZ的药动学参数(T1/2α、T1/2β、Vc、CLS)比较亦无差异,其代谢皆符合线性代谢关系。单次静脉注射TAZ与等剂量CFP/TAZ中TAZ在Beagle犬体内处置亦符合二室模型,其血药浓度及药动学参数比较皆无明显差异。结论CFP、TAZ及CFP/TAZ中的CFP、TAZ在犬体内药动学行为无相互影响,提示CFP/TAZ具有药动学理论的可行性。     

芦荟制品中芦荟苷含量测定及通便作用研究

目的 测定不同工艺生产的芦荟制品中芦荟苷的含量,观察芦荟制品对便秘小鼠排便功能的影响.方法 采用高效液相色谱法测定芦荟制品中芦荟苷的含量.采用复方地芬诺(10 mg/kg.bw)造模小鼠,灌胃给予6种芦荟制品(1.0 g/kg),观察各组首次排黑便时问、5小时粪便粒数、粪便性状、粪便干湿重.结果 (1)库拉索芦荟全叶干粉、精制干粉、全叶冻干粉、全叶喷干粉、纯化药用级干粉及市售复方芦荟胶囊六种芦荟制品的芦荟苷含量依次为0.088%、0.266%、0.908%、6.71%、13.97%和3.41%.(2)芦荟精制干粉、芦荟纯化药用级干粉能够缩短便秘小鼠的首便时间,增加其所排粪便的粒数和重量;芦荟全叶冻干粉能够缩短便秘小鼠的首便时间,增加其所排粪便重量;芦荟全叶喷干粉能够增加排出粪便的重量;芦荟全叶干粉未见明显通便作用;6种芦荟制品均不影响小鼠体重增长.结论 芦荟制品可以缓解复方地芬诺酯所致便秘,其机制可能是促进肠蠕动,加快粪便排出,发挥润肠通便作用.     

紫杉醇纳米制剂的药动学、荷瘤小鼠组织分布及系统毒性

目的研究紫杉醇纳米制剂的药动学,荷瘤小鼠的组织分布及系统毒性。方法对紫杉醇纳米制剂与市售紫杉醇注射液进行系统比较研究。结果(1)药动学:相同剂量的紫杉醇纳米制剂与紫杉醇已上市注射液静脉注射自身前后交叉设计,犬血药浓度采用HPLC法测定。PK结果表明,纳米制剂AUC、CL比同剂量注射液低(3.710±0.961vs 6.984±1.694μg.h/ml,9.032±2.051 vs 4.964±1.599ml/h.kg),其它参数比较无明显差异;(2)荷瘤小鼠组织分布:昆明种小鼠腋皮下接种H22肝癌细胞,瘤长至约1g后,随机分为2组(2.5mg/kg、4.0mg/kg),腹腔注射给药。两制剂均对H22肝癌细胞显示出良好的肿瘤治疗效果,且以2.5mg/kg纳米制剂组疗效更优;采用LC-MS/MS方法测定了二制剂在H22肝癌细胞荷瘤小鼠体内的主要组织分布,皆以小鼠胰腺、脾脏、卵巢分布最多,但纳米制剂明显高于注射液,血液分布低于注射液;(3)系统毒性:比格犬30只,♀♂各半,随机分为纳米制剂与注射液各2组(40mg/m2、80mg/m2),1个辅料对照组,单次静脉给药。给药后一般毒性反应症状与程度、血常规、血生化2组比较无明显差异;给药后14d处死动物,大体解剖无肉眼可见改变,脏器系数无明显异常;病理检查发现肝、肺有明显的病理改变,病理改变形式基本一致,但80mg/m2组病变程度明显比40mg/m2组重;40mg/m2给药时纳米制剂引起的病变程度比注射液轻。结论紫杉醇制成纳米制剂后,其体内药动行为发生明显变化,其组织分布快,有靶向趋势;以少于等剂量注射液的给药剂量即可达到相同的肿瘤治疗效果,而所引起的毒副反应明显轻于同剂量的注射液;值得对紫杉醇纳米制剂进行更深入的开发研究。