快生型大豆根瘤菌（Rhizobium fredii）3．7Kb增效片段的亚克

利用柯氏质粒ｐＬＡＦＲ１为载体构建了快生型大豆根瘤菌Ｂ５２菌株的基因文库，并通过植物结瘤试验筛选到一个３．７Ｋｂ增效片段，将其导入慢生型大豆根瘤菌２２１０，能提高其共生固氮效率。所得高效菌株ＨＮ３２在黑龙江、四川和广西大面积应用，平均增产１１．４％（５）。本文测定了３．７Ｋｂ片段的核苷酸序列，计算机分析发现含有两个开放阅读框架（ＯＲＦｓ）。ＯＲＦ１编码含１９０个氨基酸的多肽，与已报道基因和多肽的同源性很低，但其Ｎ端１９个氨基酸与发根农杆菌的乳糖转移酶高度同源。ＯＲＦ２编码含２３５个氨基酸的多肽，与碗豆根瘤菌的ｈｕｐＥ及苜蓿根瘤菌的糖基转移酶基因显示５４％的同源性。     

3株生防芽孢杆菌的筛选及对棉花枯萎病的防治研究

从植物根际土壤中筛选到 3 株对大豆根腐病、棉花枯萎病、小麦赤霉病等多种作物真菌病害有较强拮抗性的芽孢杆菌菌株 Bacillus sp.920,Bacillus sp.930 和 Bacillus sp.932.用琼脂块法分别测定了它们对 11 种植物病原真菌的抗菌谱、发酵液的抑菌活性大小及其热稳定性,并对发酵液中的抑菌活性物质进行了初步提取.结果表明,920 和 932 菌株为广谱性抗真菌菌株;930菌株仅表现出对稻瘟病菌具有较强的拮抗性.Bacillus sp.920 发酵液中的抑菌活性物质可被酸沉淀,并具有较好的热稳定性.棉花盆栽试验结果表明,接种芽孢杆茵 920 菌剂 可使棉花枯萎病引起的棉苗死亡率由 15% 降至 3.7%,发芽率比对照提高了10%.     

导入四碳二羧酸转移酶基因对费氏中华根瘤菌共生固氮效率的影响

将来自苜蓿中华根瘤菌(Sinorhizobium meliloti)的四碳二羧酸转移酶基因(dctABD)经pIJ2925克隆到广宿主、稳定性质粒pTR102上,获得诱导型表达的重组质粒pHN202.在此基础上再引入来自pDB30所含的发光酶基因(luxAB)作分子标记,以pTR102为基础构建成带有dctABD和luxAB的重组质粒pHN205.经三亲本接合转移,将重组质粒pHN205导入费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)HNO1,GR3和YC4.与出发菌相比较的盆栽试验结果表明:HN01(pHN205)和GR3(pHN205)分别在宁镇一号和川早一号大豆上能显著提高植株地上部分干重(生物量)和总氮量, YC4(pHN205)在黑龙33大豆上能同时显著提高植株地上部分干重(生物量),总氮量和根瘤鲜重.本研究结果表明:导入dctABD基因对共生固氮效率的增效性与受体根瘤菌和大豆品种等因素有关.以luxAB为报告基因进行的转移接合子培养条件下分离单菌落和共生条件下形成根瘤的发光活性检测结果表明:pHN205可在供试费氏中华根瘤菌中稳定遗传.     

3株生防芽孢杆菌的筛选及对棉花枯萎病的防治研究

从植物根际土壤中筛选到3株对大豆根腐病、棉花枯萎病、小麦赤霉病等多种作物真菌病害有较强拮抗性的芽孢杆菌菌株Bacillus sp．920,Bacillus sp．930和Bacillus sp．932。用琼脂块法分别测定了它们对11种植物病原真菌的抗菌谱、发酵液的抑菌活性大小及其热稳定性,并对发酵液中的抑菌活性物质进行了初步提取。结果表明,920和932菌株为广谱性抗真菌菌株;930菌株仅表现出对稻瘟病菌具有较强的桔抗性。Bacillus sp．920发酵液中的抑菌活性物质可被酸沉淀,并具有较好的热稳定性。棉花盆栽试验结果表明,接种芽孢杆菌920菌剂可使棉花枯萎病引起的棉苗死亡率由15％降至3．7％,发芽率比对照提高了10％。     

华癸中生根瘤菌质粒消除方法研究进展

结合对华癸中生根瘤菌(Mesorhizobium huakuii)质粒功能的研究,介绍了高温和吖啶橙处理法、标记质粒消除法和质粒的不相容性消除质粒法在华癸中生根瘤菌质粒消除中的应用,并比较了各方法的优缺点.     

用Tn5-mob-sacB转座子对华癸中生根瘤菌HN3015质粒进行定向标记、消除或缺失

采用Tn5-mob-sacB转座子对Mesorhizobium huakuii HN3015菌株含有的3条大质粒(pMhHN3015a,150 kb; pMhHN3015b , 294 kb 和pMhHN3015c,390 kb)进行定向标记,获得各个质粒标记菌株.利用sacB基因对蔗糖的敏感性,对标记质粒进行消除实验,获得HN3015质粒消除或缺失的突变株.并对HN3015及其突变菌株的培养特征、生长速度和共生结瘤能力进行了研究,结果表明:质粒消除或缺失的突变株的培养特征和生长速度与出发菌株基本一致,但是,pMhHN3015a与固氮有关,pMhHN3015b消除的菌株则失去结瘤能力,只有pMhHN3015c消除或缺失菌株不影响结瘤与固氮能力.     

本源微生物驱油机理研究及现场应用

对大港油田本源微生物驱现场试验过程中流体的微生物学特征、地球化学特征及生产动态进行了监测,研究了本源微生物提高原油采收率的机理。随注入水一同注入大量含氮、含磷盐的物质及空气,使生态系统中的微生物和理化特征发生了显着变化。地层水中嗜热微生物的数量和活性分别增加了10³～10⁵倍和10～10³倍。烃氧化菌的激活导致了注入水在近井地带原油的氧化及低分子脂肪酸含量增加。原油的生物转化产物刺激了发酵菌、硫酸盐还原菌及产甲烷菌的生长,微生物的代谢产物有利于原油的采出。从生产动态分析可以看出,经生物技术处理后,83%的生产井见到了效果,3年共增油8874t,投入产出比达到1:5.2.     

大豆根瘤菌8－1－4A色氨酸营养缺陷突变型的筛选及其原养型回复突变株共生效率的研究

采用转座子Ｔｎ５诱变快生型大豆根瘤菌（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｆｒｅｄｉｉ）８－１－４Ａ筛选到１０个色氨酸营养缺陷型突变株，植物结瘤试验表明这些菌均失去了结瘤能力。经自发突变，从培养平板和振瘤中分离出２３个色氨酸原养回复突变株，盆栽试验结果表明有２２株的结瘤能力得到恢复，其中有５株的共生效率与出发菌相比有显著提高。对部分回复突变株进行了质粒检测和以标记Ｔｎ５为探针的ＳｏｕｔｈｅｒｎＤＮＡ杂交分析。     

根瘤菌共生固氮基因的结构,功能和调控

已有的研究结果表明：根瘤菌与豆科植物的共生固氮作用量个由双方的有关基因参与，相互对话，识别、协同作用并自主调节复杂过程，本文将重点介绍了根瘤菌共生固氮基因组的结构，功能和调控方面研究的新进展。