布病胶体金免疫层析检测方法的建立

目的建立诊断布病的胶体金免疫层析方法。方法以B.abortus 544A全菌免疫BALB/c小鼠,以杂交瘤细胞技术制备单抗,纯化后以胶体金标记,选择最佳反应模式组装试纸条,并对其进行鉴定。结果已筛选4B8、1G9、1C9和1E24株稳定分泌单抗的细胞株,以其单抗互相配对组合的试纸条均能检出B.abortus 544A菌。其中以1G9为包被抗体、4B8为金标抗体的试纸检测效果最佳,与以B.abortus 544A菌多抗为包被抗体、4B8单抗为金标抗体的试纸对比,检测结果一致,且不与其他菌发生交叉反应。对PCR检测为阳性的70份牛血清样品,两种试纸条检测结果的符合率均为100%。结论所建立的诊断布病的胶体金免疫层析法快速、简便、准确,有望用于布病的诊断。     

B.abortus 544A和B.melitensis 16M多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备高效价、高纯度的布鲁菌多克隆抗体,作为检测布鲁菌的诊断试剂。方法采用弗氏佐剂乳化抗原家兔背部皮下多点免疫,制备抗体,纯化后用SDS-PAGE进行鉴定,ELISA法检测抗体水平,紫外分光光度仪检测蛋白质含量,AlphaScreenRabbitIgGDetectionKit检测IgG含量,并计算纯度。结果SDS-PAGE结果显示多抗片段大小与预期相符,B.melitensis16M和B.abortus544A抗体效价分别为1∶25600和1∶51200,纯化后抗体蛋白含量分别为11·32和14·03mg/ml,IgG含量分别为10·45和13·12mg/ml,且纯度分别达到92·3%和93·5%。结论已获得高效价、高纯度的多克隆抗体IgG,为建立布鲁菌免疫检测方法奠定了基础。     

淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、细小脲原体多重荧光定量PCR检测方法的建立及临床应用

目的建立淋病奈瑟菌(Neisseria agonorrhoeae,NG)、沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)、细小脲原体(Ureaplasma parvum,UP)多重荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)检测方法。方法选择NG保守基因porA、解脲支原体(Ureaplasma urealytieum,UU)保守基因ure及CT保守基因trp作为目标检测基因,设计引物及TaqMan探针,制备重组质粒标准品,绘制标准曲线,建立多重FQ-PCR检测方法,并验证其敏感性、特异性及重复性。用建立的方法对203份泌尿生殖道感染NG、CT、UP的临床样本进行同步检测,并与单重FQ-PCR法、常规PCR法及基因测序结果进行比较。结果重组质粒标准品经双酶切及测序鉴定,证明构建正确;建立的标准曲线起始DNA拷贝数与Ct值之间的线性关系良好,相关系数为0.998~1.000;该方法检测NG、CT和UP的灵敏度均可达102copies/ml,检测范围可达109~102copies/ml,相关系数分别为1.000、0.999和0.995;不与生殖道其他菌群如阴道霉菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌、人型支原体、单纯疱疹病毒Ⅰ型、Ⅱ型及人乳头瘤病毒(16/18型)发生交叉反应;检测的203份样本中,多重FQ-PCR检测NG、CT、UP的阳性检出率分别为34.48%、30.54%、18.71%,与单重FQ-PCR法、基因测序法比较,差异无统计学意义(P0.05),3种方法阳性检出率均高于常规PCR法;与基因测序法相比,多重FQPCR法灵敏度为100%,3种病原体检测特异性均高于98.50%。结论已成功建立NG、CT、UP多重FQ-PCR检测方法,该法检测时间短,特异性强,灵敏性高,适合于临床快速诊断。     

经翼点入路显微手术治疗破裂前交通动脉瘤

目的:总结经翼点入路显微外科手术夹闭破裂前交通动脉瘤的临床经验。方法:回顾性分析我院2008年7月-2013年7月行经翼点入路显微手术治疗的53例破裂前交通动脉瘤患者的影像学资料、诊疗经过、并发症、预后等。结果:早期手术(3d内)10例,中期手术(4-14d)31例,延期手术(大于14d)12例。手术效果按GOS评定(出院时),恢复良好36例(67.9%),中残7例(13.2%)重残6例(11.3%)死亡4例(7.5%)。结论:经翼点入路显微手术治疗前交通动脉瘤疗效确切,术前充分准备及正确评估,选择正确手术时机,术中对颅内压控制、对动脉瘤破裂出血正确处理、娴熟的显微手术技术以及熟练掌握局部显微解剖是保证手术成功的关键。     

囊泡相关膜蛋白8的研究进展

膜融合对真核生物的诸多生命活动至关重要,需要不同的囊泡转运蛋白互相配合,从而特异性协调并辅助不同生物膜的融合,这些囊泡转运蛋白高度保守。囊泡相关膜蛋白8(vesicle associated membrane protein 8,VAMP8)主要定位于囊泡膜和溶酶体膜,其在多种不同生物膜的融合中发挥重要作用。本文就VAMP8的分子结构、转录调控和翻译后修饰、生物学功能及其与人类疾病相关性的研究进展作一综述,以期为治疗相关疾病和开发有效的VAMP8靶点药物提供新思路。