小剂量辐射诱导哺乳动物细胞对基因突变的适应性反应

预先用小剂量γ射线照射小鼠SR-1细胞,然后观察其对随后大剂量γ射线照射诱发细胞hprt基因突变的影响。0.01 Gy小剂量一次预照射,18h、24h后能显著降低3Gy照射诱发SR-1细胞的hprt基因突变频率。细胞每天接受一次0.01Gy照射,共10d,累积剂量达0.1Gy后,6h就能产生上述效应,并可持续到小剂量刺激后的48h,hprt基因突变频率下降了30%—40%。     

抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)在CHO细胞表达

［摘 要］目的 开展基因重组AT-Ⅲ的研究，试将人AT-Ⅲ cDNA在CHO细胞中进行表达。方法 将携带AT-Ⅲ基因的表达载体转染CHO细胞，用 G418筛选抗性克隆，SDS－PACE与Western Blot检测其表达产物；并采用生化法测定AT-Ⅲ的表达量，采用凝血酶空斑法测定表达产物的活性。结果 Western Blot分析发现转移至膜上的表达产物能与抗AT-Ⅲ单克隆抗体结合，分子量与人血浆中AT-Ⅲ一致，证明在CHO细胞中成功地表达了AT-Ⅲ，并具有天然AT-Ⅲ的生物活性。结论 获得了表达AT-Ⅲ CHO细胞株。     

利用DNA改组筛选高活性抗凝血酶Ⅲ

目的　利用DNA改组技术大幅度提高抗凝血酶Ⅲ (AT -Ⅲ )的生物活性。方法　采用RQ1DNaseⅠ不完全酶解ST -Ⅲ基因 ,产生长度为 5 0～ 10 0bp的随机片段 ,用低熔点胶回收。无引物PCR从小片段组装成大片段 ,通过有引物PCR得到正确大小的片段。线性化的质粒通过电转转入毕赤酵母GS115细胞。结果　获得了 5株高活性的克隆。结论　探索了在毕赤酶母进行DNA改组和筛选的方法和路线 ,成功进行了AT Ⅲ的改组 ,并为其它分子的改组提供借鉴。