应用HIV免疫阳转血清评价HIV抗体检测试剂的质量

目的 应用免疫阳转血清对HIV抗体检测试剂质量进行评价。方法 采用HIV-1核心区p24、gp41、膜区gp120和全病毒抗原免疫家兔制备系列兔血清,评价国内外HIV抗体双抗原夹心法试剂的质量。结果免疫阳性血清可用于测定试剂对各不同区域抗体检测的能力。结论 对评价试剂盒敏感性有实际意义。     

HIV抗体酶联免疫诊断试剂批内和批间精确性分析

目的　了解HIV抗体酶联免疫试剂批内和批间的精确性。方法　用同一批试剂多次检测同一样品和不同批次试剂分别检测同一样品 ,分别计算其批内和批间的变异系数 (CV) ,分析试剂的批内和批间的精确性。结果　用 1份样品对12家试剂的批内精确性分析结果显示 ,所有试剂的批内变异系数均在 15 %以内 ,符合要求 ,但不同试剂的变异系数不同 ,且有统计学差异。用 5份样品对 12家不同批次试剂的批间变异系数进行分析 ,在所得到的 6 0个变异系数中 ,仅有 3个变异系数小于或等于 15 % ,大部分试剂的批间变异系数均在 2 0 %以上。结论　HIV抗体酶联免疫试剂的批间精确性变异较大 ,其批间稳定性有待进一步提高。     

不同HIV抗体检测试剂检测抗HIV-1膜蛋白抗体的敏感性

目的分析不同HIV抗体检测试剂检测HIV-1B’和BC重组型膜蛋白抗体的敏感性。方法选择HIV-1B’和BC重组型感染者血浆,用gp41抗原和gp160抗原分别进行亲和层析纯化。将各纯化产物进行系列稀释,用15种HIV抗体ELISA检测试剂以及3种HIV抗原/抗体联合检测试剂进行检测。结果用gp41抗原纯化后的样品只含有抗gp160和gp41的抗体带型,而用gp160抗原纯化后的样品含有抗gp160、gp120和gp41的抗体带型。进口试剂检测不同基因型样品的敏感性低于大部分国产试剂,国产试剂检测不同基因型的样品的敏感性无明显差异,而进口试剂检测B’亚型抗体的能力低于检测BC重组型抗体的能力。结论不同基因型的抗体对HIV抗体检测试剂的敏感性可能有一定的影响。     

HIV抗体国家参考品(胶体金类试剂)的建立及其应用

目的建立HIV抗体国家参考品(胶体金类试剂)并对其应用效果进行分析。方法通过对阳性和阴性样品的筛选,确定候选参考品的组成,经标定,确定参考品的质量标准,并以此为标准对试剂的质量进行检测和评估。结果参考品由20份阳性、20份阴性、3份最低检测限和1份精密性样品组成。质量标准为20份阳性样品,应均为阳性,20份阴性样品中应至少18份为阴性,最低检测限样品应至少1份为阳性,且稀释用血浆应为阴性,精密度样品检测10次,其颜色反应一致。共检测进口注册、国内注册以及常规检定样品189批,其中进口注册样品合格率为81.8%,国内注册样品合格率为80.8%,常规检定样品合格率为96.2%。结论该参考品可反映试剂的质量水平,对保证试剂的质量具有重要作用。     

第二代HIV-Ab国家参比品的建立

以现行 HIV- Ab国家参比品为基础 ,从国内 2 0 0 0多份血浆中筛出 HIV- Ab自然弱阳性血浆 15份 ,其中 3份为中等强度以上反应性。阴性血浆 2 0份 ,保留第一代参比品中 3份人工稀释的低反应性血浆及 2份抗HIV- 2型抗体阳性血浆 ,共 40份血浆 ,组成第二代 HIV- Ab国家参比品。与现行国家参比品相比 ,以国内自然弱阳性标本为主 ,能够更准确地考核试剂盒的灵敏度 ,同时也对其提出了更高的要求。     

HIV-1核酸血筛试剂国家参考品的研制

目的研制HIV-1RNA血筛试剂国家参考品。方法收集HIV-1病毒培养物、我国不同地区的HIV-1感染者血浆以及正常人样品,经HIV-1病毒载量试剂检测,对HIV-1RNA阳性的样品进行env基因型分析,从中筛选参考品的候选样品。结果共筛选8份HIV-1RNA阳性的样品作为阳性参考品,病毒载量均高于5000IU/ml;8份HIV、HBV、HCV均为阴性的血浆样品作为阴性参考品;以1份病毒培养样品作为灵敏度参考品的原始样品,经WHOHIV-1RNA标准品标定,其HIV-1病毒载量为3.79×104IU/ml;反复3次冻融对参考品的病毒载量无明显影响。结论已制备HIV-1RNA血筛试剂国家参考品,为我国HIV-1核酸血筛试剂的质量控制和标准化提供了依据。     

嗜人类T淋巴细胞病毒I型核心蛋白P24基因的克隆与表达

目的 从感染HTLV－1的中国患者外周血单核细胞（PBMCs)中扩增编码HTLV－1核心蛋白P24的cDNA，并在大肠杆菌中进行表达。方法 提取感染者PBMCs基因组DNA，应用巢式PCR方法扩增出HTLV－1核心蛋白P24的cDNA并测序，与GEX-20T载体构建重组质粒，在大肠杆菌BL21中表达，采用ELISA和Western blot分析重组蛋白活性。结果 HTLV－1核心蛋白P24基因序列高度保守，构建重组载体后，在大肠杆菌中表达的重组蛋白，经检测具有较强的抗原活性。结论 成功地表达了HTLV－1型病毒的核心蛋白P24基因，为国产诊断试剂和疫苗的研发打下了基础。     

HIV抗体确认试剂国家参考品的建立

目的建立评价HIV抗体确认试剂的国家参考品。方法从我国部分地区收集HIV感染者或可疑感染者以及非HIV感染者血浆样品,并对其进行HIV抗体、核酸以及抗体条带等检测,从中筛选出有代表性的样品组成参考品,用4家不同的HIV抗体确认试剂进行检测和标化。结果共筛选出27份样品组成HIV抗体确认试剂参考品,其中10份为HIV抗体确认阳性参考品,12份为HIV抗体确认阴性参考品,5份为HIV抗体不确定参考品。用4家不同的HIV抗体确认试剂标化12次,10份HIV抗体确认阳性参考品均检测为确认阳性;5份不确定参考品均检测为确认阳性或不确定,无检测为阴性者;12份阴性参考品10次均检测为确认阴性。结论该参考品可用于评价HIV抗体确证试剂的质量。     

国产HIV抗体诊断试剂的质量评价

目的评价国产ＨＩＶ抗体诊断试剂的质量。方法用４４００份义务献血员的血样，评价国内９ 个厂家的 ＨＩＶ抗体诊断试剂的特异性；ＨＩＶ抗体阳性样品 ３ ３６８份，评价试剂的灵敏度；测定各试剂结果的真实性 及相关质量指标。结果国产ＨＩＶ抗体诊断试剂的特异性、阳性预示值基本在９９％以上，但灵敏度仍存在一定差 距。结论通过对国内主要生产厂家生产的试剂质量的评价，了解制品质量，有益于进一步提高国产试剂的质量。     

治疗用乙型脑炎单克隆抗体注射液的研制

用清洁级F1代小鼠制备日本脑炎病毒单克隆抗体腹水，经辛酸沉淀、硫酸铵盐析粗提后，再通过凝胶过滤柱层析纯化。每毫升腹水可得到单克隆抗体4～4．5mg，纯度大于95％，回收率为60％～70％，蚀斑中和法测定活性大于5×105，无鼠源病毒污染，经各项检测均符合人用鼠源性单克隆抗体的要求。按有关规程研制成治疗用乙型脑炎单克隆抗体注射液，经全面检定符合临床试验的标准。