微生物酪氨酸解氨酶的研究进展

微生物转化生产次生代谢物质是重要的方式,但已知的微生物中未发现次生代谢物质的前体物质肉桂酸-4-羟基化酶(C4H)和香豆酸,这限制了微生物转化生产一些次生代谢产物。酪氨酸解氨酶(TAL)能跳过C4H将L-酪氨酸(L-Tyr)转化为香豆酸,为此对微生物来源的TAL的酶学性质、晶体结构、催化机制及TAL基因工程方面的研究进行了阐述,发现了TAL研究中存在的问题并初步提出了解决思路。     

漆酶高产菌的筛选及产酶优化

采用愈创木酚初筛平板从干枯的木头中筛选得到一株产漆酶活力较高的菌株SYBC-L3(以下简称L3),在含有愈创木酚的PDA平板上生长时菌落周边出现明显的铁红色变色圈.通过对L3发酵产漆酶的单因素试验及L9(34)正交试验,确定了最适发酵条件,优化后的培养基为:麦芽糖 12 g/L, 豆粕 6 g/L,CuSO4 0.5 g/L,KH2PO4 1 g/L,Na2HPO4 0.2 g/L,MgSO4 ·7H2O 0.5 g/L,MnSO4 0.034 g/L, 愈创木酚0.8 mmol/L,吐温-80 0.5g/L;优化后的培养条件为:接种量10%(V/V),装液量80 mL/250 mL, 起始pH 4,转速200 r/min,温度30 ℃,以DMP为底物在第8天时酶活可达60 130 U/L,比优化前提高42倍.     

一株碱性低温脂肪酶产生菌发酵条件的优化

通过单因素实验,对SYBC Wu-3菌摇床发酵产脂肪酶的培养基组成和培养条件进行优化,得出较佳的产酶培养基组成配方为:蛋白胨5 g/L,酵母膏 6 g/L,NaH2PO4 3 g/L; 油脂250 mL/L,乳化剂OP 25 mL/L.最优发酵条件为250 mL的摇瓶装液量50 mL,培养温度30 ℃,发酵时间72 h.经过优化后发酵液脂肪酶酶活力最高可达到10.68 U/mL,较优化前提高了2.8倍.     

活性氧对白腐真菌漆酶合成的影响

分别将不同活性氧在发酵第4天加入发酵产酶培养基中,一定时间后通过测生物量和漆酶酶活研究外界活性氧对白腐真菌漆酶合成的影响,并通过活性电泳进一步验证。结果表明:低浓度的活性氧可以通过信号传导方式调控漆酶合成,超氧阴离子抑制白腐真菌产漆酶,过氧化氢和羟自由基促进白腐真菌产漆酶。实验结果对漆酶合成调控、植物-病原菌相互作用以及生物防护具有重要意义。     

杏鲍菇菌渣产漆酶及其在染料脱色中的应用

以杏鲍菇菌渣为原料,探讨了其固态发酵产漆酶的条件,并对粗酶液在染料脱色中的应用进行了初步探索。结果表明,当添加质量分数4%甘蔗渣、质量分数1.2%硝酸铵、质量分数1.0%碱木素时,杏鲍菇菌渣产酶能力最强,达到386.9 U/gds。相对于杏鲍菇菌渣初始漆酶酶活18.6 U/gds,优化后提高了20倍以上。最适条件下,发酵粗酶液在无介体存在下对甲基红、活性艳蓝K3R、酸性蓝209、活性艳蓝KNR的脱色率分别达到85.8%、85.6%、68.3%、71.2%,在添加介体的条件下活性艳蓝K3R、酸性蓝209、活性艳蓝KNR的脱色率分别达到88.8%、93.4%、89.7%。显示出杏鲍菇菌渣漆酶良好的环保应用前景。     

一株从腐烂蓝藻中分离的细菌的鉴定及其发酵产蛋白酶研究

应用形态学、生理生化和16S rRNA基因序列分析方法,鉴定了从腐烂蓝藻中分离得到的一株细菌,利用液态发酵法探讨了碳、氮源等对其发酵产蛋白酶的影响并研究了其部分酶学性质.结果表明,该菌可归入沙雷氏菌属,定名为Serratia marcescens SYBC YH,其最适碳源为果糖、葡萄糖、羽毛粉或玉米粉,最适氮源为玉米浆粉、酵母膏和牛肉膏;该菌还可以蓝藻为唯一氮源发酵产耐有机溶剂蛋白酶.该酶的最适温度为40℃,最适pH为7.0.     

无患子提取物对Fusarium sp.发酵产脂肪酶的影响及其双水相萃取分离

研究了表面活性剂对Fusarium sp.的发酵产脂肪酶的影响.结果表明,添加无患子提取物的酶活为最高,说明无患子提取物是最佳的的表面活性剂,并且确定提取无患子提取物的液固比为6:1(mL∶g)时酶活达到最高.粗酶液经(NH4)2S04沉淀后进行双水相萃取分离,结果表明,采用质量浓度为30 g/dL的PEG(M 4000)和质量浓度为20 g/dL的NaH2 PO4时纯化系数F和萃取率Sf达到最高;经过双水相萃取后,该脂肪酶的纯化倍数可以达到7.92,回收率为48.30％.     

Pycnoporus sp. SYBC-L3漆酶催化偶氮染料脱色

为考察 Pycnoporus sp. SYBC-L3漆酶Lac-L对偶氮染料的脱色、解毒效果,探究最佳的脱色反应条件,采用单因素分析方法研究了不同的反应条件对Lac-L催化3种偶氮染料（AR1、RB5、RV5R）脱色的影响,得到最佳处理条件,并通过比较被漆酶降解前后的染料对小麦和水稻发芽率及根、芽生长的影响,分析其毒性变化。结果表明：在以HBT为介体、反应温度50 ℃、pH分别为4.0（AR1,RV5R）和5.0（RB5）、漆酶用量1 U/mL、染料初始质量浓度分别为30 mg/L（AR1）和50 mg/L（RB5、RV5R）条件下,漆酶对3种偶氮染料的脱色效率最高,AR1和RV5R几乎完全降解,脱色率达到96.1%和97.8%,而RB5也有83.8%的脱色率。植物毒理实验表明,3种偶氮染料经漆酶降解后对小麦和水稻发芽率没有影响,对胚芽和根生长的抑制作用也有所降低。     

外源激素和糖类对银杏离体叶叶绿素降解的调节

以银杏叶为材料,采用叶圆片法,探讨了外源糖类、植物生长调节物质对叶绿素降解和叶绿素酶活性的影响,结果表明0.02 mol/L蔗糖或葡萄糖在叶绿素降解初期能够显著提高叶绿素酶活性,10 -7 mol/L的6-苄基腺嘌呤能够延缓叶绿素降解的速率,并使叶绿素酶的活性维持在较高水平.     

薰衣草产酚酸内生真菌的分离及产物初步鉴定

利用人工种植的薰衣草及无锡本地采集的相同品种薰衣草,对其各组织内生真菌进行分离、纯化。分别分离得到18和23株内生真菌。对所筛选出的菌株进行固态发酵,并对其发酵培养产物进行提取。通过化学反应的方法从野外采集薰衣草内生真菌中筛选出一株产酚酸的菌株,并通过分子生物学方法对其进行初步鉴定,并对其固态发酵提取物进行初步研究。研究结果表明了薰衣草内生真菌的多样性,为通过微生物固态发酵产酚酸类物质提供理论和实验基础。