重组人干扰素α2a凝胶对单纯疱疹病毒感染的疗效

目的研究重组人干扰素α2a(rhIFNα2a)凝胶对动物体内单纯疱疹病毒(HSV)感染的疗效。方法建立HSV-1型豚鼠皮肤感染模型和HSV-2型小鼠阴道炎模型,考察rhIFNα2a凝胶抗HSV作用。将模型豚鼠与小鼠各自分为3个试验组,分别用3×105、2×105和1×105IU/g的rhIFNα2a凝胶治疗,并设平行对照(阿昔洛韦)与空白对照(未治疗)组。评价各组的疗效。结果与空白对照组比较,rhIFNα2a凝胶2×105和3×105IU/g剂量组可明显减少豚鼠皮肤组织中病毒含量,降低小鼠的死亡率,延长生存期。rhIFNα2a凝胶与阿昔洛韦的疗效差异无显著意义。结论rhIFNα2a凝胶具有抑制HSV-1致皮肤病变作用,可缩短病程,对HSV-2所致小鼠阴道炎有较好疗效。     

应用吖啶橙- 分光光度法检测重组人白介素- 2制品中SDS含量

目的 用吖啶橙－分光光度法检测重组人白细胞介素－2（rIL－2）制品中Si含量。方法 将被检样品与吖啶橙混合后，加入甲苯进行萃取，然后用紫外分光光度计测　A499吸收峰。结果 在 0-0．o1％SDS浓度范围内，SDS浓度与A400呈线性关系，本法可检测浓度低至 0．001％的 SDS。结论 在一定的 SDS浓度范围内可用吖啶橙-分光光度法检测SDS。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子工程菌高密度发酵及表达产物的纯化

目的 研究重组人碱性成纤维细胞生长因子工程菌高密度发酵和表达产物的纯化工艺。方法采用最适基质浓度、pH、溶氧量、培养温度等发酵表达条件及产物提纯方法。结果 菌体密度A6000达40.8,表达量达160mg/L。提纯的bFGF回收率为40％,生物学活性（ED50）为 0.21ng/mL,比活性达4.76×106U/mg,其纯度、分子量、残余DNA等各项检测结果均符合“重组 DNA制品质量控制要点”。结论 为hbFGF工业化生产和临床应用提供了依据。     

人黏蛋白1串联重复区基因真核表达载体的构建及其在动物细胞中的表达

目的构建人黏蛋白1串联重复区(MUC1 VNTR)17重复序列肿瘤抗原真核表达载体,并在COS-7、HeLa和Lewis细胞中表达。方法设计1对分别含SalⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,PCR法合成1重复MUC1 VNTR片段,克隆入pGEM-Teasy载体,依据SalⅠ和XhoⅠ酶切产生相同黏性末端的特性,依次连接,构建17重复MUC1 VNTR(17m),再亚克隆至VR1012真核表达载体,构建真核表达质粒VR1012-17m。分别转染COS-7、HeLa和Lewis细胞,并进行检测。结果酶切鉴定和序列分析证实,构建的重组质粒含17m序列,经转染的COS-7、HeLa和Lewis细胞,RT-PCR检测均有17m mRNA转录,Western blot检测均有17m蛋白的表达,并与MUC1 VNTR单抗产生特异性反应。结论已成功构建17m肿瘤抗原真核表达载体,并在COS-7、HeLa和Lewis细胞中得到表达,可用于MUC1疫苗和肿瘤生物学治疗的进一步研究。     

人黏蛋白1串联重复区DNA疫苗诱导小鼠的免疫应答

目的观察人黏蛋白1串联重复区(MUC1 VNTR)DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的体液及细胞免疫应答。方法将含有33个黏蛋白1重复区序列(33m)的重组质粒pVR1012-33m,经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,并加强免疫2次,每次100μg,间隔2周,分别以空载体pVR1012和生理盐水为对照。末次免疫后取小鼠血清及脾淋巴细胞,Western blot检测血清抗体特异性,LDH法检测CTL反应活性,MTS/PMS法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果重组质粒免疫组小鼠血清中检出了MUC1 VNTR抗原特异性抗体。用重组质粒pVR1012-33m免疫BALB/c小鼠后,在效靶比为100:1和33:1时,可显著地诱导特异性CTL应答。在MUC1 VNTR抗原肽的刺激下,免疫小鼠脾淋巴细胞得到增殖,与空载体和生理盐水对照组相比,差异均有显著意义。结论DNA疫苗pVR1012-33m在BALB/c小鼠体内可诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答,为预防、治疗性MUC1 VNTR疫苗的研制提供了一定的实验依据。