疫苗毒种支原体检测中去除本病毒干扰方法的探索

目的探索疫苗毒种支原体检测中去除本病毒干扰的方法。方法分别采用非敏感细胞直接接种法、特异性抗血清中和法及离心加中和法处理21株疫苗毒种样品后,评价去除本病毒干扰的效果。结果21株疫苗毒种中,13株可通过非敏感细胞法去除本病毒干扰;6株可通过特异性抗血清中和法去除干扰;2株可通过离心加中和法去除干扰。应用上述3种方法检测161批疫苗毒种,均能有效去除本病毒干扰。结论非敏感细胞直接接种法、特异性抗血清中和法及离心加中和法可针对不同毒种去除本病毒的干扰,适用于疫苗毒种的支原体检测。     

吸附纯化乙型脑炎灭活疫苗的研制

目的　建立简便、适合大规模生产的纯化工艺 ,用以生产纯化乙型脑炎灭活疫苗 ,提高乙型脑炎灭活疫苗的质量。方法　按乙型脑炎灭活疫苗的制造方法获得灭活的乙型脑炎病毒液 ,经超滤浓缩、凝胶过滤柱层析纯化以及氢氧化铝吸附制备试验疫苗 ,并按新生物制品注册要求考察质量情况。结果　纯化后的层析收集液有效地去除了原疫苗中的大部分杂蛋白 ,制备的试验疫苗各项质量指标均符合规定。结论　用此工艺制备的纯化疫苗质量可靠 ,有希望成为原制乙型脑炎灭活疫苗的换代产品     

原代地鼠肾细胞乙脑灭活凤苗中残余细胞基质的检测

目的 找出多批原代地鼠肾细胞乙型脑炎来活疫苗过敏反应发生率的原因，提出解决方案。方法 利用JPLC排阻层析结合ELISA方法相对定量地分析高反应性疫苗的残余细胞基质成分，并利用凝胶过滤柱层析去除疫苗中细胞源性杂质。结果 高反应性疫苗中地鼠肾细胞基质成分的残留量高；利用常压凝胶过滤柱层析法可将残留的细胞基质成分几乎完全去除。结果 本次过敏反应事件是由部分疫苗中地鼠肾细胞基质成分残量偏高所致，用一步分子筛柱层析处理疫苗是一种简单有效的解决办法。     

生物制品用原辅料微生物限度检测方法的验证

目的建立生物制品用原辅料(乳糖、葡萄糖、明胶、淀粉、胰酶、纯化水)微生物限度检查法,并进行验证。方法分别采用平皿法及薄膜过滤法检测上述6种原辅料的微生物限度,并按设立的验证试验方法,在供试品中加入5种标准菌,测定标准菌的回收率。结果大肠埃希菌、金黄葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉5种标准菌在上述6种原辅料供试品溶液中的平均回收率均大于80%,符合《中国药典》二部(2005版)中要求大于70%的合格标准。结论平皿法适用于检测乳糖、葡萄糖、明胶、淀粉、胰酶等原辅料的微生物限度,薄膜过滤法适用于检测纯化水的微生物限度。     

牛血清中牛腹泻病毒牛肾细胞直接病变检测方法的建立

目的建立牛血清中牛腹泻病毒(BVDV)的牛肾细胞直接病变检测法。方法将样品接种至牛肾(CK)细胞上,通过观察细胞病变,判定样品是否污染BVDV。结合病毒增殖曲线及不同培养时间的检出率,确定最佳判定时间,并对检测方法进行验证及应用。结果该方法的最佳判定时间为10d;测定限度为100～240CCID50/ml;样品冻融次数及不同批次的牛血清样品对试验结果影响较大;应用该方法检测134批牛血清样品,BVDV污染率约为7.5%。结论已建立牛血清中牛腹泻病毒牛肾细胞直接病变检测法。     

鸡胚细胞制备17D黄热疫苗

目的应用鸡胚细胞制备17D黄热疫苗。方法细胞与病毒同时接种,选择病毒增殖的适宜条件,收获病毒液,加入稳定剂,制备成冻干鸡胚细胞黄热疫苗,并进行鉴别试验、病毒滴定和疫苗保护力试验。结果病毒增殖的最适MOI为0.00046PFU/cell;最适培养温度为37℃;第2天洗换,第4天收获更合适;最适病毒感染细胞数为6.80×105～7.00×105个/ml。病毒感染鸡胚细胞后,滴度可达6.15～6.97LgPFU/ml。疫苗主要指标均达到《中国生物制品规程》(2000版)和WHO对疫苗的要求。免疫小鼠45d后,用卵黄囊疫苗4×103PFU脑内攻击,小鼠全部存活。结论在适宜的条件下,用鸡胚细胞制备17D黄热疫苗,能达到WHO疫苗人用标准。鸡胚细胞有取代鸡胚卵黄囊制备黄热疫苗的可能。     

世界卫生组织乙型脑炎灭活疫苗质量控制与规程修订研讨会

2006年6月1至2日,在瑞士日内瓦WHO总部召开了非正式乙型脑炎灭活疫苗质量控制与规程修订研讨会.     

生物制品中支原体检定方法的验证及统计学评价

目的　确定稳定、准确而可靠的支原体检测方法。方法　采用培养法与DNA荧光染色法分别检测已知阴阳性样品 ,对各组检测结果进行比较 ,验证其试验内及试验间重复性 ;检测待检样品 ,分别验证它们的可靠性。并用统计学方法评价它们的准确性及诊断价值。结果　培养法试验内、间重复性均在 95 %以上 ,可靠性Kappa值为 0 . 85 7,试验稳定性优于荧光法。而荧光法灵敏度较高。两种方法同时检测相同待检样品时 ,检测结果符合率为 93 .1% ,两种方法联合检测的试验内及试验间重复性均在 90 %以上 ,可靠性Kappa值为 0 . 88,并且其诊断指标(尤登指数、阳性似然比、验后概率及灵敏度、特异度 )均较高 ,尤其是阳性似然比为 2 93,而其验后概率为 99. 2 %。用此联合系列检测方法共检测了 6 1批次生物样品 ,有 10批次检出有支原体污染。结论　两种方法联合检测支原体重复性、可靠性及准确性指标均较高 ,是稳定、准确并可靠的检定方法。