铁离子和半胱氨酸对抗体电荷异构体分布的影响

目的：研究Fe³⁺和Cys对CHO细胞表达免疫球蛋白G(IgG)电荷异构体比例的影响。方法：在补料分批培养外泌表达IgG的CHO细胞株中,以不同的策略单独或联合添加不同浓度的Fe³⁺或Cys;培养14 d后离心得上清液,通过生化分析仪测定上清液中IgG的含量,利用Protein A MagBeads亲和纯化该抗体,通过糖基化修饰、阳离子亲和层析(CEX)、非还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳(nrCE-SDS)、硼酸亲和层析(BAC)及疏水相互作用色谱(HIC)进行鉴定。结果：Fe³⁺的添加可提高IgG酸性异构体比例,并且Cys可增强Fe³⁺的提升效果,仅添加Cys对酸性异构体的比例没有影响;电荷异构体表征表明酸性异构体含量提高主要源于唾液酸修饰、片段、Fc段氨基酸位点氧化修饰以及糖化水平的增加。结论：Fe³⁺与Cys通过提高唾液酸修饰、片段的丰度、糖化水平以及某些氨基酸位点的氧化,导致IgG酸性异构体比例显著增加。