大肠杆菌丙酮酸脱氢酶的克隆与表达优化

为了在大肠杆菌中表达大肠杆菌丙酮酸脱氢酶,用PCR法从大肠杆菌总DNA中克隆了pdc基因,将其插入载体pGEX-KG后转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下实现了表达.通过对表达条件的优化,在TB M9(1∶1)培养基中,33℃下使用终浓度0.5 g·L-1的乳糖诱导4 h,重组大肠杆菌丙酮酸脱氢酶的表达量可占全菌蛋白的45%左右,比未优化前提高了约20%,同时大大降低了成本.     

久效磷人工抗原的制备、鉴定与免疫效价的测定

以戊二醛为交联剂制备了久效磷(Mcp)人工抗原(Mcp-OVA)和包被抗原(Mcp-BSA),采用紫外吸收光谱和SDS-PAGE对人工抗原进行了鉴定.取人工抗原免疫BALB/c小鼠,并采用ELISA法对小鼠抗血清效价进行了检测.结果表明,人工抗原中Mcp与OVA的偶联比为23.3:1,Mcp-OVA的最适包被浓度为1.5 μg·mL-1,3次免疫后小鼠的抗血清效价均达到1:2×105以上.