肠道病毒71型3C基因原核表达质粒的构建表达及纯化

目的构建肠道病毒71型(Entervirus71,EV71)3C基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中进行表达并纯化。方法以病毒的反转录产物为模板,PCR扩增EV71 3C基因,克隆至pGEx-4T-1载体中,构建重组表达质粒pGEx-3C,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。表达的重组融合蛋白GSR-3C经GST-Agarose亲和层析和分子筛层析纯化后,Western blot检测其反应原性。结果重组表达质粒pGEx-3C经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组融合蛋白相对分子质量约46 000,表达量约占菌体总蛋白的50%,主要以可溶性形式表达;纯化后的重组融合蛋白纯度大于90%,可与小鼠抗EV71单克隆抗体特异性结合。结论成功构建了重组表达质粒pGEx-3C,在大肠杆菌中高效分泌表达并纯化了重组GST-3C融合蛋白,为EV713C蛋白酶结构与功能的研究及3C靶向药物和疫苗的研究奠定了基础。     

责任扛在肩上 奉献写在一线——记中建四局江苏建设投资有限公司党委副书记、工会主席车其杰

“直面历史不纠结,直面困难不畏惧,直面自己不菲薄,直面未来不懈怠。”这是车其杰的座右铭。“工作没有捷径,我必须用责任和担当来做好每一件事!”这是车其杰的工作信条。1984年出生的车其杰,从初出茅庐的技术员到企业专职副书记,从工地“救场大将”到职工“暖心主席”,从施工一线到疫情防控一线,这位“80后”用一砖一瓦诠释新时代青年人敢打敢拼、敢做善为的精气神,用“全国工程建设行业杰出科技青年”“全国工程建设诚信项目经理”“江苏省建设系统优秀工会工作者”“江苏省优秀建造师”等一次又一次的跨越,镌刻青春奋斗之路。