3-甾酮-△^-脱氢酶的融合表达及纯化

3-甾酮-△^1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶。能催化3-甾酮化合物在C1.2位处脱氢，提高原有底物的生物活性。利用表达载体pET-30a，实现了简单节杆菌3-甾酮-△^-脱氢酶在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析．并用分光先度法检测酶的活力。结果表明，表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在。利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白，复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍。     

色褐链霉菌磷脂酶D基因pld的克隆与表达

利用表达载体pET-22b( ),实现了色褐链霉菌磷脂酶D基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达.利用镍亲和柱对表达产物进行纯化,将纯化后的重组磷脂酶D作用于底物卵磷脂和丝氨酸定向合成磷脂酰丝氨酸,并用HPLC法检测酶活力.结果表明,目的蛋白可在短时间内进行大量表达.转酯反应6 h后卵磷脂的转化率达到31%,重组磷脂酶D活力达到39 U·(mg蛋白)-1.     

Rhizopus chinensis 12#发酵产生纤溶酶的分离提纯

分离自南方小酒药的华根霉12#(Rhizopuschinensis12#)以豆粕和麸皮为原料固体发酵可产生多种纤溶活性组分.采用饱和度40%～70%的硫酸铵溶液分步盐析、OctylSepharoseFastFlow疏水层析、Q SepharoseHighPerformance离子交换层析和SephacrylS 100凝胶层析方法对活性组分进行分离提纯,得到电泳纯的纤溶酶.SDS PAGE方法测定该酶相对分子质量为18000,凝胶过滤方法测定相对分子质量为16600,表明该酶由单亚基组成.     

糖化酵母在干啤酒生产中应用的研究（Ⅱ）：原生质体细胞融合法选育高…

本文利用ＰＥＧ诱导原生质细胞融合技术，进行糖化酵母单倍体Ｈ－３（２）－２菌株与优良嗜杀啤酒酵母５－２４菌株的原生质体细胞融合实验。在对融合亲本不做任何遗传标记的情况下，将糖化酵母的糖化酶基因转移到嗜杀啤酒酵母中，获得１株高发酵度嗜杀啤酒酵母Ｆ－３５－８８菌株。     

嗜杀苹果酒酵母的构建

采用核融合缺陷原生质体融合技术 ,将嗜杀质粒供体菌 5 0 45 (α ,his4,kar1— 1[KIL—K1 ]rho+ )中的嗜杀质粒转移到受体菌苹果酒酵母AW中去。用 3 5 %PEG ,3 0℃诱导融合 2 0min ,经嗜杀活性检出、小型酿造实验、遗传稳定性实验、细胞大小及体积的测定、dsRNA质粒的提取及琼脂糖凝胶电泳等实验 ,筛选出 4株遗传性状稳定、具有嗜杀活性且发酵性能良好的融合子F12、F3 0、F5 7、F65。     

糖化酵母在干啤酒生产中应用的研究（Ⅰ）──具有糖化酶活性和去除POF1基因的糖化酵母的选育

比较了多株单、双倍体糖化酵母，选出糖化酶活性及发酵度较高的糖化酵母单倍体──Ｓｏｃ．ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ２６０６７－４４。同时发现糖化酵母单倍体菌株的酶活性高于二倍体菌株。含有ＰＯＦ１基因的糖化酵母（ｐｏｆ＋表型）可脱羧肉桂酸形成苯乙烯，ｐｏｆ－菌株无此能力。通过气相色谱检测肉桂酸－酒花麦汁发酵液中的苯乙烯含量，可以鉴别出去除ＰＯＦｌ基因的菌株。本文利用酵母菌的群体杂交法，通过Ｓ．ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ２６０６７－４４与酿酒酵母单倍体杂交，获得１株糖化酶活性及发酵度较高，并且去除了ＰＯＦ１基因的单倍体菌株Ｈ－３（２）－２（ａ，ＳＴＡ，ｐｏｆ－）·     

酵母菌发酵降低山楂汁有机酸含量的研究

山楂汁用酵母菌在溶氧25％～35％、20℃条件下进行84h发酵,采用高效液相色谱法和酸碱滴定法测定样品中的有机酸含量。结果表明,山楂汁中总酸为17.10g/L,其中柠檬酸含量为14.07g/L,苹果酸含量为1.24g/L。山楂汁发酵后总酸下降到3.52g/L,其中柠檬酸全部降解,苹果酸降解了86.6％,其它有机酸含量变化不大。柠檬酸降解速度在发酵的72h内与时间呈线性关系,苹果酸降解则发生在48～72h     

中空纤维膜过滤法高密度培养凝结芽孢杆菌TQ33

利用中空纤维超滤装置进行TQ3 3高密度培养 ,确定了采用过滤法进行高密度培养的工艺流程和参数。在对数后期 ,当乳酸质量浓度达到 15g/L时 ,开始过滤培养。过滤培养阶段持续 6h ,培养过程中平均过滤速率和培养基的流入速率为 1L/h ,平均稀释率为 0 4/h。对通过试验所确定的工艺进行高密度培养 ,最终菌体和芽孢浓度分别达到 1 6× 10 10 cfu/mL和 1 2× 10 10 cfu/mL ,是分批培养的 2 1倍和 3 7倍     

纳他霉素发酵工艺探讨

通过研究不同温度、不同pH、不同溶解氧、不同接种种龄及接种量对发酵生产纳他霉素的影响,发现生产纳他霉素较佳的发酵条件是:温度29℃,接种量2%,种龄26h,溶解氧30mg/L,pH随发酵的不同阶段而进行控制。     

山楂干酒中还原性物质的分析与还原糖含量测定

用斐林试剂测定山楂酒中还原糖含量为14．2g/L，不符合干酒的还原糖要求。分析表明：半乳糖醛酸在山楂干酒中含有8．10g/L，相当于7．53g／L还原糖，多酚类物质相当于3．7g／L还原糖，是影响还原糖测定的主要还原性物质；山楂干酒中实际还原糖含量为2.97g/L,符合干酒标准。山楂干酒中的还原糖含量可以通过活性炭吸附与HPLC或活性炭与强碱性阴离子交换树脂吸附两种方法进行定量测定。