大豆球蛋白G5A3亚基加工破坏表位的初步定位

大豆球蛋白是重要的大豆过敏原,为探究大豆球蛋白G5亚基中A3酸性多肽链的破坏表位,对A3亚基的基因进行重叠分段并设计合成引物、构建克隆载体后进行双酶切,与T7 vector arms连接构建重组噬菌体并表达目的蛋白;制作热处理及超高压联合热处理破坏抗原表位的特异性抗体,用间接竞争ELISA法检测不同肽段的抗原性高低及加工破坏表位。结果表明,A3链与其3个分段基因的长度分别为：960、420、450、450 bp,与预期片段大小相符;经间接竞争ELISA法检测后,片段1抗原性最高,通过阴性对照,超高压联合热处理对该亚基的破坏效果优于单独热处理试验,其中对片段1的破坏效果最好。因此,超高压联合热处理的方法对蛋白抗原性破坏效果显著,且对片段1破坏最强。     

己烷雌酚免疫原的合成及其鼠源抗血清的制备

目的合成己烷雌酚(hexestrol,HES)免疫原,并制备其鼠源多抗血清。方法在HES的适当位点上引入活性基团羧基(-COOH)得到HES的半抗原,采用EDC/NHS法合成人工免疫原HES-BSA和检测抗原HES-OVA,经紫外扫描和SDS-PAGE鉴定HES与载体蛋白BSA、OVA是否成功偶联;用免疫原(HES-BSA)免疫3只BALB/c小鼠,获得抗HES多抗血清(polyclonal antibody serum,pAbs),ELISA法检测其效价,间接竞争ELISA法检测其敏感性,交叉反应(cross-reactivity,CR)试验检测其特异性。结果免疫的1号小鼠pAbs效价达到1. 28×104,2号和3号小鼠均在6. 4×103以上;1号小鼠HES pAbs对HES的50%抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为19. 93 ng/mL,除与己烯雌酚有11. 63%的CR外,与其他结构类似物无CR。结论获得了效价高及敏感、特异的多抗血清,为进一步的免疫学快速检测提供了技术支持。