生物表面活性剂产生菌BYS6的产物特性与稳定性研究

从延长油田采油厂的土样中分离出一株不动杆菌BYS6(Acinetobacter sp.),在以甘油为碳源的培养基中发酵可产生生物表面活性剂,红外光谱检测该产物为糖脂类生物表面活性剂,在25℃室温条件下将发酵培养基表面张力从69.8mN/m降低至32.3mN/m左右。对原油的乳化降粘效果良好,9d后乳化相仍可保持86%。经测定其临界胶来浓度CMC值为70mg/L。该产物性能稳定,在不同温度、pH和矿化度条件下表面活性剂性能保持不变。     

天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白的原核表达、纯化与发酵

目的原核表达天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白,并进行纯化和发酵。方法全基因合成带有凝血酶切割位点的天蚕素B和表皮生长因子融合基因,克隆入pET22b(+)-X表达载体中,构建重组质粒pET22b-CecropinB-EGF,分别转化大肠杆菌BL21(DE3)和Rosetta-gami2(DE3),经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE及Westernblot分析。镍离子亲和层析纯化融合蛋白并复性后,对其促表皮生长活性进行测定,最后在5L发酵罐中进行发酵。结果酶切及测序结果显示,融合蛋白基因已克隆入pET22b(+)-X表达载体中;SDS-PAGE分析显示,天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白在Rosetta-gami2(DE3)宿主菌中得到了有效表达,表达量约占全菌总蛋白的30%;Westernblot分析显示,表达产物可与表皮生长因子单克隆抗体特异结合;融合蛋白的表达形式为包涵体;纯化、复性后的融合蛋白具有促BALB/c3T3细胞生长的活性,在5L发酵罐中进行发酵,1次可收获菌体约60g。结论已成功地在大肠杆菌Rosetta-gami2(DE3)中表达了天蚕素B和表皮生长因子融合蛋白,为研究具有抗菌和促伤口愈合的双功能药物奠定了基础。     

人源溶菌酶基因在杆状病毒系统中的表达

目的在杆状病毒系统中表达人源溶菌酶(Human lysozyme,hLY)基因,为其临床应用和大规模生产奠定基础。方法将人工合成的含信号肽和不含信号肽的溶菌酶基因克隆至重组杆状病毒表达系统的载体中,构建重组穿梭质粒,转染sf9细胞,SDS-PAGE和Western blot验证蛋白的表达,溶菌试验验证表达产物的溶菌酶活性。结果重组克隆质粒PFastBacHTA-signal-lysozyme和PFastBac HTA-lysozyme的PCR产物分别可见444和393 bp的目的基因条带,测序结果证实重组克隆质粒构建正确。PCR结果显示Lysozyme-1、Lysozyme-2、slysozyme-1、slysozyme-2、slysozyme-3、slysozyme-4号重组穿梭质粒可扩增出目的条带。sf9-PHLY和sf9-PHSLY的表达产物经12%SDS-PAGE分析,分别可见相对分子质量约17 500和19 300的特异蛋白条带;表达的两种重组蛋白均可与鼠抗6×His单抗特异性结合;表达产物具有溶菌酶活性。结论成功在杆状病毒表达系统中表达了hLY基因,为其临床应用和大规模生产奠定了基础。     

有机酸及相关盐类在果蔬护色、防褐变中的应用研究

考察了不同浓度的曲酸、抗坏血酸、乳酸及ZnC l2、CaC l2、乳酸锌、乳酸钙处理苹果和梨的防褐变时间。结果表明,曲酸的护色效果最好。当曲酸浓度>0.1%时,防褐变效果很好,24 h时只有轻微褐变;当乳酸钙浓度>1.0%,抗坏血酸浓度>0.25%,ZnC l2浓度>0.75%,CaC l2浓度>1.0%时,防褐变效果均较好。