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目的评价表达人源化抗血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)单克隆抗体(简称抗VEGF单抗)的重组CHO细胞(K11细胞)传代稳定性。方法细胞培养瓶中进行K11细胞连续传代,于培养1、4和7个月时测定K11细胞的倍增时间、单细胞抗体表达量和基因拷贝数。在传代培养过程中,分别于传代培养2、3、4、5和7个月时将K11细胞接种至全自动生物反应器中进行发酵培养,测定发酵培养产物的单抗表达量,测序单抗轻、重链基因;采用三步层析(亲和、阴/阳离子交换层析)纯化人源化抗VEGF单抗,分析人源化抗VEGF单抗的纯度、电荷异质性、一级结构和生物学活性。结果 K11细胞在细胞培养瓶中连续传代培养1、4和7个月时,对数生长期K11细胞的倍增时间分别为25、23和34 h,单细胞抗体表达量分别为15. 6、15. 0和11. 5 pg/(个·d),单细胞基因拷贝数分别为200、219和204 copies/个。生物反应器发酵培养5批单抗,纯化后单抗表达量为1. 18~2. 06 g/L,K11细胞单抗轻、重链基因测序结果均与理论序列一致,人源化抗VEGF单抗SEC-HPLC单体纯度为96. 23%~98. 21%,电荷异质性和一级结构相似,生物学活性为(0. 859~0. 901)×10^4U/mg。结论 K11细胞在工业化生产规模的培养周期内保持稳定,可满足人源化抗VEGF单抗的商品化的生产需要。 相似文献
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随着近几年汽车市场火爆现象的持续,国内4S店现有的、僵化的营销模式已经不再适应愈加激烈的市场竞争。通过完善顾客信息、建立百分百回访制度、加强网站建设,有效提高服务营销水平,增强4S店的竞争力。 相似文献
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利用原子吸收光谱法分析原理,采用GGX-9型原子吸收分光光度计测定排放水中的铜铬锌镍。不同元素的空心阴极灯作锐线光源,能辐射出不同的特征谱线,因此,可在同一试液中连续测定排放水中的铜铬锌镍,且彼此干扰较小。 相似文献
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主要论述了含金样品经过高温焙烧,王水溶解,泡沫塑料震荡分离富集,硫脲盐酸溶液解脱后,以抗坏血酸作为基体改进剂,用石墨炉原子吸收光谱仪进行分析测试样品中金的含量。通过对实验过程中各个流程因素的对比实验,确定了最佳的分析实验条件,保证了测试结果的准确性。 相似文献
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介绍了以锗-苯基荧光酮-乙醇为体系,分光光度法测定矿物中的锗,探讨了该方法的最佳实验条件。结果表明,试样酸溶后,在强酸性溶液中,锗与苯基荧光酮生成的络合物被萃取后,于517nm处有最大吸收,其εmax=2.3×10^5L·mol^-1·cm^-1,锗含量在0~0.179g/mL符合比尔定律,精密度(RSD,n=6)为2.3%。回收率为98%~104%。方法应用于矿物中锗的测定,可不经洗涤和反萃取便使Ge与其它元素分离,结果满意。 相似文献
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