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目的分离脊髓灰质炎病毒Ⅲ型Sabin株(sPVⅢ)C抗原和D抗原,并分析其部分特性。方法采用CsCl密度梯度离心法分离sPVⅢ的C抗原和D抗原,电镜观察病毒形态;SDS-PAGE检测病毒结构蛋白组成;微量BCA法检测蛋白浓度,计算每种抗原所占比例;细胞病变法检测病毒滴度。同时检测上样浓度及超离次数对C抗原纯度的影响。结果sPVⅢC抗原和D抗原在透射电镜下均呈球形,C抗原病毒颗粒密度较小,外壳大多较为松散,D抗原病毒颗粒密度较大,结构更稳固;C抗原由VP0、VP1、VP3蛋白组成,D抗原由VP1、VP2、VP3和VP4蛋白组成;C抗原和D抗原分别约占总蛋白含量的10%和90%,部分C抗原在分离前及分离过程中易产生聚集;D抗原的病毒滴度高于C抗原。降低上样浓度及进行二次超离可提高C抗原纯度。结论采用CsCl密度梯度离心法成功分离了sPVⅢ的C抗原和D抗原,C抗原滴度远低于D抗原,且部分易产生聚集,较难达到较高纯度。 相似文献
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聚乳酸/聚乙醇酸可生物降解微球的制备及其对RNP的佐剂作用 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 制备包裹狂犬病毒核衣壳 (RNP)的PLA/PLG可生物降解微球 ,并观察其对RNP的佐剂作用。方法 以蛋白载量、包裹率、微球形态及粒径分布作为评价微球质量的指标 ,通过变换制备条件 ,获取质量较好的微球 ;观察三种不同聚合物材料制成的RNP微球在体外 37℃条件下的水解和释放 ;比较不同微球免疫效果。结果 PLA/PLG微球作为RNP载体 ,单剂接种诱生实验动物的抗NP抗体与AL(OH) 3 佐剂两次接种的滴度接近 ,但明显好于不加佐剂的对照组。结论 PLA/PLG微球对RNP具有良好的佐剂作用。 相似文献
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目的比较3种不同密度梯度离心方法对脊髓灰质炎病毒空心颗粒、实心颗粒的分离效果。方法选择蔗糖密度梯度离心、氯化铯密度梯度离心、Optiprep(碘克沙醇溶液)密度梯度离心方法,对脊髓灰质炎病毒进行纯化,抽取离心之后的蛋白条带,通过计算蛋白回收率、SDS-PAGE分析、病毒颗粒透射电镜观察,评价其对病毒空心颗粒、实心颗粒的分离效果。结果病毒液经蔗糖、氯化铯和Optiprep 3种介质超速离心,均能分离空心颗粒和实心颗粒。氯化铯密度梯度离心法蛋白回收率优于Optiprep及蔗糖密度梯度离心法;Optiprep密度梯度离心法蛋白纯度优于氯化铯及蔗糖密度梯度离心法。结论通过蛋白回收率、SDS-PAGE分析、病毒颗粒透射电镜观察初步评价了3种方法对脊髓灰质炎病毒空心颗粒和实心颗粒的分离效果,为脊髓灰质炎病毒分离纯化提供了参考。 相似文献
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目的对检测轮状病毒滴度的荧光灶试验(FFA)方法进行改进。方法以FFA法检测轮状病毒滴度,并观察残留血清、病毒吸附量、甲基纤维素、离心以及Ca2+等因素对检测结果的影响,并验证改进后FFA的重复性。结果残留血清、病毒接种量、吸附后不洗涤、PBST洗板对FFA检测结果均无影响。而接种病毒后离心及不加甲基纤维素覆盖与对照组比较,差异有显著意义。用改进后方法对同批病毒进行18次试验,CV值为1.7%。结论改进后的方法具有操作简便、结果稳定、重复性好等优点。 相似文献
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