Real-time PCR检测核酸疫苗中宿主基因组残留DNA

目的建立Real-time PCR方法,用于定量检测核酸疫苗中宿主基因组的残留DNA。方法以Lightcycler平台为基础,选择大肠杆菌23S核糖体RNA基因为靶标基因设计扩增引物,建立基于SYBR GreenⅠ荧光染料的Real-time PCR检测方法,并用于核酸疫苗纯化过程中间产物的检测。结果整个检测过程可在30min内完成,特异性强,检测灵敏度可达10fg/μl,其标准曲线的相关系数为-0.99。结论该方法可用于核酸疫苗中宿主基因组残留DNA的检测。     

提高内毒素去除效果的质粒DNA层析纯化工艺的优化

目的优化质粒DNA分子筛或离子交换层析工艺,提高内毒素去除效果。方法在经精胺沉淀初步纯化的质粒DNA溶液中,加入不同浓度的EDTA(5、10和20mmol/L)或SDS(0.1%、0.2%和0.5%),分别进行Sephacryl S-1000分子筛层析及Source30Q离子交换层析,收集质粒峰,测定内毒素含量。结果用含0.5%SDS的质粒溶液进行分子筛层析,用含10～20mmol/L EDTA或0.1%～0.5%SDS的质粒溶液进行离子交换层析,质粒DNA的内毒素含量均<5EU/mg。结论添加一定浓度的EDTA或SDS可提高质粒DNA分子筛层析或离子交换层析去除内毒素的效果。综合考虑安全性因素,推荐用含10mmol/L EDTA的质粒溶液进行Source30Q离子交换层析。