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1.
以谷胱甘肽为配基,琼脂糖微球为骨架,探索将谷胱甘肽通过共价键偶联到琼脂糖微球骨架上,制备可以分离谷胱甘肽S转移酶(Glutathione S-transferase, GST)及以其为标签的融合蛋白的亲和吸附介质.采用正交实验方法考察了谷胱甘肽加入量、偶联缓冲液的pH值和反应温度对亲和介质配基密度的影响.结果发现,该反应过程中的pH值对配基密度影响最大,其次为谷胱甘肽的加入量.用所制备的亲和吸附介质纯化GST(大鼠肝脏谷胱甘肽S转移酶),发现GST的吸附量随配基密度增加而增加,但GST活性却随配基密度的增加而下降,较好的干胶配基密度为260 μmol/g.大鼠肝匀浆液经过离子交换和亲和层析两个步骤,获得了电泳纯的GST,比活力为12.08 U/mg,总活性回收率为40%以上. 相似文献
2.
通过添加控制丙酸浓度考查了费氏丙酸杆菌发酵生产VB12的过程中丙酸抑制细胞生长的浓度范围,在此基础上利用树脂对发酵过程中丙酸进行了选择性吸附后细胞的生长和脱氧腺苷钴胺素合成的变化。研究结果表明,丙酸的浓度在10.0g/L时,对菌体细胞生长产生了明显的抑制。在丙酸浓度积累到10.0g/L之前,利用树脂对其吸附分离出2.5g/L的丙酸后,生物量提高了37.5%,脱氧腺苷钴胺素产量提高了50.0%。该实验为实现丙酸的在线分离和丙酸/VB12高效联产的新型耦合发酵工艺提供了基础。 相似文献
3.
以快流速琼脂糖凝胶为基质,采用直接偶联法制备丁基琼脂糖疏水层析介质. 考察了影响反应的主要因素,通过四因素三水平正交实验和单因素实验,确定丁基琼脂糖疏水层析介质的优化反应条件为:反应温度45℃,反应时间45 min,催化剂三氟化硼乙醚用量0.02 mL/g. 在此条件下严格控制琼脂糖凝胶的含水量,改变丁基缩水甘油醚用量,制备了不同丁基密度的丁基琼脂糖疏水层析介质. 用不同密度的系列介质考察对牛血清白蛋白的吸附性能,初步研究了配基密度与吸附性能的关系;研究了疏水层析介质的机械稳定性和化学稳定性. 结果表明,其各项性能良好,具有广阔的应用前景. 相似文献
4.
用盐析与疏水层析相偶合快速分离提纯猪胰激肽释放酶 总被引:4,自引:0,他引:4
将疏水层析技术用于从猪胰脏中分离纯化激肽释放酶,建立了一种简便、快速的分离提纯方法:将粗品溶解后经过硫酸铵沉淀处理,然后经过Butyl Sepharose FF疏水层析后得到目标蛋白,分析其纯度大于500U/mg,盐析和疏水两步纯化的收率大于85.0%,同时比较了Phenyl Sepharose FF,Octyl Sepharose FF和Butyl Sepharose FF三种疏水介质分离纯化胰K的效果,本实验工艺与传统工艺相比,具有操作简单、快速、回收率和纯化倍数高等优点,有望成为一种从动物组织中快速分离纯化药用蛋白质的有效技术平台。 相似文献
5.
The separation of fungal suspension Trichoderma reesei was studied by using cross-flow filtration(CFF)with re-versed-flow cleaning(RFC)technique.The advantage of this technique is demonstrated in comparison with other filtra-tion techniques.The filtration rate is influenced by different frequencies of RFC.For optimum combination of CFF andRFC,both experimental and theoretical considerations are necessary and are discussed.An expression has been derivedfor the optimum filtration time needed to maximize the flux for a given RFC period assuming that the filtration stage canbe approximated by Ruth’s equation.The practical usefulness of this calculation is demonstrated on a batch thickening op-eration. 相似文献
6.
7.
8.
微球材料的粒径均一性和结构可控性直接影响其应用效果,这对过程工程提出了挑战。在发展微孔膜乳化过程制备均一乳液和微球的基础上,对均一乳液的形成机理进行了研究,通过对液滴形成过程的控制,在油/水、水/油、水/油/水等体系成功制备出了均一微球。通过发展微球结构演变过程的定量研究方法,成功对微球结构进行了调控;针对生化工程对超大孔微球的重要需求,发展了超大孔微球制备方法,实现了孔径在100 nm到微米级的调控。研究了粒径均一性和结构对其应用效果的影响。微球应用于生物分离介质时,粒径均一性提高了蛋白质的分离度;超大孔微球可使超大生物分子快速进入介质内部,显著提高纯化回收率。微球应用于胰岛素口服药物载体时,粒径对其在消化道的分布有显著影响,中空-多孔微球显示了最佳的降血糖效果。 相似文献
9.
利用静电纺丝法制备含LiCl的聚氨酯(PU)纳米纤维,用牛血清白蛋白(BSA)对纤维亲水改性,于其上固定b-D-半乳糖苷酶,提高酶在油水两相介质中催化转糖苷反应的活力. 结果表明,以PU浓度26%(w)的电纺液制备的直径240~300 nm的PU纤维膜在LiCl辅助作用下吸附BSA高达222 mg/g,使纤维膜的水接触角由103.7o降至77.3o. 改性PU膜固定化酶比活力为1.59 U/mg,而未改性PU膜仅为其79.2%. 改性膜固定化酶55℃下的活力半衰期高达游离酶的14倍,在4℃下储存45 d活力仍保持80%,而游离酶活力仅剩余16.3%;改性膜固定化酶重复催化42次转糖苷反应活力仍能保持31%. 相似文献
10.
以蓖麻油基阴离子水性聚氨酯为载体,采用生物3D打印技术制备含碳酸酐酶的生物活性聚氨酯涂层,并与传统涂覆法制备的含酶涂层进行对比。通过动态光散射、红外、扫描电镜-X射线能谱、热重、接触角等各种手段对涂层中酶与水性聚氨酯之间的相互作用进行了分析表征。结果表明,在形成生物活性涂层过程中,碳酸酐酶是通过与聚氨酯链段上阴离子基团的静电吸引被固定在聚氨酯涂层中。催化活性结果表明,与传统涂覆法相比,涂层的酶活回收率为50.51%,比传统涂覆法提高了4倍。这可能是由于生物3D打印技术制备的含酶涂层更薄、更均匀,表面更平滑。 相似文献