硫代苄基半胱氨酸结晶介稳区的测定及分析

考察了硫代苄基半胱氨酸(SBC)在不同的温度、pH值下的不同溶剂中的溶解度及SBC的结晶介稳区。并应用经典成核理论,计算得到固液界面张力σ,预测了SBC的结晶介稳区,理论计算值与实验数值非常相近,表明Mullin估算方法对于氨基酸类化合物结晶分离研究,仍有实际指导意义。     

硫代苄基半胱氨酸反应结晶过程的研究

以L-半胱氨酸为原料,用NaOH溶液作为反应介质,乙醇作为氯化苄的稀释溶剂,进行流加操作反应结晶制备硫代苄基半胱氨酸.通过正交试验获得最佳的合成条件,氯化苄流加速率为0.73 mL/min,半胱氨酸与氯化苄摩尔比为0.8：1.0,反应温度为5℃,搅拌转速为250 r/min,产物收率为91.26%.扫描电镜分析结果表明,用乙醇作溶剂流加操作下结晶形态远好于未加乙醇溶剂的晶行.得到了产物的初级成核速率方程和反应结晶达到拟稳态时晶体生长速率方程.     

酶法制备γ-D-glutamyl-L-tryptophan的动力学模型

以酶法合成γ-D-glutamyl-L-tryptophan (γ-D-Glu-L-Trp)为研究体系,采用D-谷氨酰胺为γ-谷氨酰基供体,L-色氨酸为受体,测定得到了转肽反应的米氏常数（K _m）为5.11 mmol·L^-1,催化常数（K_cat）为3.92 mmol·min^-1,γ-D-Glu-L-Trp的水解反应米氏常数（K′_m）为2.31 mmol·L^-1,催化常数（K′_cat）为1.46 mmol·min^-1。采用顺序反应机制建立了酶法制备γ-D-Glu-L-Trp的过程动力学模型,并进行了参数优化。经验证,所建模型可准确预测该体系中的反应进程,模型数值解与实验值的平均相对误差小于5%。     

化学酶法合成γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸

以Bacillus subtilis NX-2产γ-谷氨酰转肽酶为催化剂,以L-谷氨酰胺和S-苄基-L-半胱氨酸为底物,利用转肽反应合成了S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸,考察了反应时间、初始酶浓度、供体/受体比以及投料方式等条件对反应过程的影响.结果表明,在L-谷氨酰胺浓度为20 mmol/L,S-苄基-L-半胱氨酸浓度为20 mmol/L,酶浓度为0.0208 U/mL以及pH9条件下,于40℃水浴中反应3 h,S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氦酸得率为5.14 mmol/L,对谷胺酰胺的转化率为25.7%.采用分批投料方式可有效提高谷氨酰供体转化率.S-苄基-γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酸以三氟甲磺酸脱除苄基保护基,经RPC纯化后可得产物GGC,产物纯度为91.2%,收率为75.7%.     

γ-谷氨酰转肽酶及其应用

γ-谷氨酰转肽酶(EC2 3 2 2,γ-GT)在生物体内分布相当广泛,从细菌到哺乳动物体内都有它的存在。该酶能催化3种类型的反应、转肽反应,自转肽反应和γ-谷氨酰基的水解反应。γ-GT在临床检测中可作为生物标志物,已经用作肝脏和其他疾病的常规检测指标。该酶在生物催化合成中也有相当重要的应用,利用此酶可以合成多种含γ-谷氨酰基的化合物。     

以L-谷氨酰胺-铜（Ⅱ）配合物为供体酶法制备茶氨酸

A novel method for enzymatic synthesis of L-theanine using copper（Ⅱ）-L-glutamine［Cu（Gln）₂］as donor substrate was proposed.The structure of Cu（Gln）₂ was identified by infrared spectrum analysis and its stability was also investigated under the reaction conditions.The enzymatic synthesis of L-theanine catalyzed by γ-glutamyltranspeptidase was carried out by using Cu（Gln）₂ and L-glutamine as donor substrate respectively,and the product yield and conversion rate of donor substrate were compared under the conditions of different ratios of donor and acceptor.The results showed that the transpeptidation reaction could be effectively enhanced by using Cu（Gln）₂ as donor substrate.The conversion rate of donor would increase by 51.5%,44.9% and 27.1% under different reaction conditions,compared to that using L-Gln as donor substrate.When the molar ratio of donor to acceptor was 6∶100,a higher donor conversion of 71.3% was obtained.     

甘氨酸铜法制备DL-丝氨酸的研究

通过对甘氨酸铜法制备DL 丝氨酸中α 羟甲基丝氨酸生成机理的研究 ,确定了控制丝氨酸生成的条件 :n(铜 )∶n(甘氨酸 )∶n(甲醛 ) =1∶10 0∶80 0 ,pH =8.5～ 9.5 ,反应 40min ,丝氨酸质量浓度为 13.6 7mg mL     

γ-谷氨酰转肽酶的酶学性质及其转肽反应机制

γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,GGT)能专一地催化γ-谷氨酰基的转移,在γ-谷氨酰基类衍生物的合成方面具有重要的应用价值.今利用Bacillus subtilis NX-2发酵生产GGT,上清液中的GGT经硫酸铵沉淀后,以DEAE Sepharose FF和 Source 15 Q 两步离子交换进行纯化.以γ-D-Gln-L-Trp(SCV-07)为目的产物,研究了GGT的基本酶学性质,确定了其最适反应温度为40 ℃,最适Ph值10.0, 供体/受体浓度为5:7,最适反应时间为4 h,产物转化率可高达42%.结合反应进程曲线,分析了GGT的作用机制,并通过实验证实了GGT不仅具有转肽活性,还可催化产物的不可逆水解,这是导致产物回收率下降的关键原因.经测定得到GGT的转肽反应米氏常数(Km)为5.08 mmol·L-1,最大反应速率(rmax)为0.034 mmol·(min·L)-1;对γ-D-Gln-L-Trp的水解反应米氏常数(Km')为2.267 mmol·L-1,最大反应速率(rmax')为0.012 mmol·(min·L)-1.