以霍乱毒素B亚单位为载体的甲型副伤寒多糖结合疫苗理化及生物学特性

目的制备甲型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphi A,SPA)O特异多糖(O-specific polysaccharide,OSP)-霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTB)结合疫苗,并初步探讨其理化及生物学特性。方法 SPA OSP多糖原液(简称OSP多糖)经溴化氰活化,己二酰肼(ADH)衍化,在碳二亚胺(EDAC)作用下与CTB偶联,结合物经Sepharose4FF柱纯化,获得多糖-蛋白结合物,对其理化指标、血清特异性、免疫原性及血清体外杀菌力进行检测。结果制备的SPA OSP-CTB结合物(简称OSP-CTB结合物)衍化度为(2. 63±0. 13)%、多糖回收率为(74±0. 2)%;鉴别试验显示OSP-CTB结合物与SPA O诊断血清、CTB抗体均有阳性沉淀线产生;免疫小鼠血清中OSP-CTB结合物抗体滴度显著增长,阳转率达100%,血清体外杀菌抗体滴度为1∶64。结论用溴化氰活化多糖制备的SPA OSP-CTB结合物具有良好免疫原性,可进一步进行疫苗研发。     

竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖的含量

目的采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)的含量,以替代小鼠免疫力试验方法。方法用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,并分析与小鼠免疫力试验检测结果的一致性。结果霍乱灭活疫苗中LPS的含量与疫苗保护力呈正相关。结论采用竞争抑制ELISA法检测霍乱灭活疫苗中LPS的含量,能够反映疫苗的保护力,为进一步替代小鼠免疫力试验方法奠定了基础。     

壳聚糖纳米粒在甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白疫苗中的应用

目的探讨壳聚糖(chitosan,CS)纳米粒作为甲型副伤寒沙门菌重组外膜蛋白NmpC和PagC的佐剂对小鼠的免疫效果。方法采用离子交联法将甲型副伤寒沙门菌重组外膜蛋白NmpC和PagC与CS结合制成CS纳米粒,扫描电镜观察纳米粒外观,激光粒度分析仪测定纳米粒粒径和多分散系数,BCA法测定其包封率。将CS纳米粒经肌肉注射免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清特异性抗体IgG、IgG_1和IgG_(2a)水平。结果载蛋白CS纳米粒粒径约为300 nm,包封率达85%以上。NmpC和PagC的CS免疫组小鼠血清IgG抗体滴度远高于铝佐剂组,产生的IgG_1和IgG_(2a)抗体滴度也均高于相应的铝佐剂免疫组,且差异均有统计学意义(P0.05);IgG_1和IgG_(2a)之间差异无统计学意义(P0.05)。结论 CS纳米粒作为新型疫苗佐剂可用于甲型副伤寒蛋白疫苗的研究。     

壳聚糖介导甲型副伤寒沙门菌nmpC和pagC DNA疫苗的构建及其免疫效果

目的构建壳聚糖(chitosan,CS)介导的甲型副伤寒沙门菌nmpC和pagC的DNA疫苗,并探讨该疫苗的免疫效果。方法按哺乳动物的密码子偏好性对nmpC和pagC的基因序列进行优化,并将优化后的序列克隆至真核表达载体provax中,构建provax-nmpC和provax-pagC DNA疫苗。采用复凝聚法制备载DNA疫苗的CS纳米粒,并对CS/DNA纳米粒的特性进行检测。将provax-nmpC和provax-pagC DNA疫苗及其相应的CS纳米粒体外转染BHK细胞,采用Western blot检测目的蛋白的表达。采用活体电击法分别用不同组分的蛋白免疫小鼠,ELISA法检测血清抗体水平及抗体类型。结果 provax-nmpC和provax-pagC DNA疫苗经双酶切鉴定,构建正确。疫苗可与CS发生有效结合,纳米粒形似球形,粒径均一,包封率均达90%以上,且CS可防止DNA被DNaseⅠ酶降解。provax-nmpC及CS/provax-nmpC均能诱导小鼠产生有效的免疫反应,两组间差异无统计学意义(P0.05);provax-pagC与CS/provaxpagC均能诱导小鼠产生有效的免疫反应,且provax-pagC组的抗体水平明显高于CS/provax-pagC(P0.05)。provax-nmpC和provax-pagC组的IgG1及IgG2a抗体水平均高于相应的CS组(P0.05),且IgG1和IgG2a间差异无统计学意义(P0.05)。结论 DNA疫苗provax-nmpC和provax-pagC均可诱导有效的免疫反应;载基因CS纳米粒并未增强DNA疫苗的免疫效果;CS未改变DNA疫苗的免疫应答类型,但具有调节Th1和Th2平衡的作用。     

屋尘螨变应原制剂外观异常对其质量的影响

目的分析屋尘螨变应原制剂外观异常对其质量的影响。方法依据进口药品注册标准(JS20130104)对1批(T6469)屋尘螨变应原制剂进行全面质量检定,同时与检定合格样品(A3016、A3064及A3110批)进行相应比对,Western blot鉴定主要变应原组分,纳米粒径颗粒分析仪检测制剂中铝佐剂-蛋白吸附物的中值粒径(D50)。选取检定合格样品进行冷冻模拟验证,观察低温冷冻对制剂外观性状的影响。结果 T6469批制剂外观不均一(外观性状异常与正常样品),混悬液浊度有差异,部分样品出现摇不散的贴壁颗粒,外观性状异常样品与正常样品比较,浑浊度降低,沉降速度增快,铝佐剂吸附物液面高度明显低于外观正常样品。经检定,T6469、A3016、A3064及A3110批制剂pH、铝含量、苯酚含量及游离上清活性均在质量标准范围内,在相对分子质量25 000及14 000处均出现特异性条带,但T6469批外观性状异常样品条带变弱。T6469外观性状异常与正常样品之间D50差异有统计学意义(P <0. 05);检定合格样品冻存前后D50差异有统计学意义(P <0. 05)。T6469批外观性...     

预防O139霍乱B亚单位/全菌体口服疫苗的研究

目的 研制预防O139霍乱的B亚单位／全菌体口服疫苗。方法 应用重组霍乱毒素B亚单位及福尔马林灭活的O139霍乱弧菌全菌体,构建成B亚单位／全菌体疫苗,并进行安全性及免疫原性检测。结果 经连续3天大剂量灌喂小鼠后,未见体重下降、发病或死亡现象。全部小鼠均健康活存。以腹腔或口服免疫小鼠后,均能产生外周血或肠道局部高滴度的特异抗体。免疫小鼠对O139活菌攻击有良好的保护作用。结论B亚单位／全菌体口服疫苗在小鼠试验中安全性及免疫原性良好。