基于ASP的远程教学系统的设计与实现

介绍了基于ASP数据库开发的主要技术,设计和实现了远程网络教学系统,促进院校教学的网络化、信息化发展,提高了院校教学的效率和质量。     

类胰岛素生长因子I(IGF-I)基因的克隆及融合蛋白的表达

目的 扩增类胰岛素生长因子Ｉ（ＩＧＦ－Ｉ）２１０ｂｐ的ＤＮＡ片段,将其克隆到ＰＧＥＸ－１ λＴ质粒,并转化到 Ｅ．ｃｏｌｉ　ＮＨ５２２中高效表达。方法 用改进的ＲＴ－ＰＣＲ法合成人肝脏ｃＤＮＡ,然后从该ｃＤＮＡ文库中扩增出ＩＧＦ－Ｉ基 因。将扩增的ＩＧＦ－Ｉ ｃＤＮＡ用 ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲ　Ｉ双酶切后,插入到同样双酶切处理的ｐＧＥＸ－１λＴ载体中,连接转化 Ｅ． ｃｏｌｉ　ＮＭ５２２,筛选克隆,酶切鉴定后,进行了核苷酸序列分析及表达。结果 将ＩＰＴＧ诱导表达的菌体离心收集,经 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,在相对分子质量３４０００处可见明显高表达带,表达量可占菌体蛋白总量的２０％以上。免疫印迹表 明重组蛋白具有ＩＧＦ－Ｉ的抗原性。结论　重组人ＩＧＦ－Ｉ的成功克隆与表达,将为进一步研究人ＩＣＦ－Ｉ的生物学特性 打下基础。     

HEV部分ORF_2重组蛋白的纯化及其在酶标试剂中的初步应用

目的 获得具有生物学活性的重组蛋白,用于制备抗－ＨＥＶ酶标试剂盒。方法 将插入的含ＨＥＶ 部分开放读码框２（ＯＲＦ２）的重组菌扩大培养,诱导表达,纯化,鉴定,组装酶标试剂盒。结果 纯化的重组蛋白经 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定,在相对分子质量５６０００处有一明显的蛋白带,经ＣＳ－９３０薄层扫描纯度达９５％以上,经免疫印迹 分析,具有良好的免疫学特异性。此ＨＥＶ试剂盒,检测阳性病人血清样品阳性率为９４．７４％,检献血员血清样品阳 性率为５．４３％。结论 该纯化的ＨＥＶ部分ＯＲＦ２重组蛋白组装的试剂盒特异性及敏感性均较好。     

胰岛素样生长因子I(IGF-I)基因的克隆及分泌表达

目的　构建原核分泌型表达载体并高效表达胰岛素样生长因子I(IGF I)。方法　构建出 2种分泌型表达载体 ,命名为pCSA和pCST ,并将胰岛素样生长因子I(IGF I)基因插入pCSA和pCST中 ,转化E .coliW3110 ,经筛选获得工程菌pCSA/IGF I/W3110和pCST/IGF 1/W3110 ,并进行表达。结果　经SDS PAGE检测 ,在相对分子质量 76 0 0处有明显表达带 ,Westernblot表明重组蛋白具有IGF I的抗原性。结论　原核分泌型IGF I的高效表达 ,为进一步研究人IGF I的功能和生物学特性打下基础     

类胰岛素生长因子Ⅰ（IGF—Ⅰ）基因的克隆及融合蛋白的表达

目的扩增类胰岛素生长因子I(IGF-Ⅰ)210bp的DNA片段,将其克隆到PGEX-1λT质粒,并转化到E.coliNH522中高效表达.方法用改进的RT-PCR法合成人肝脏cDNA,然后从该cDNA文库中扩增出IGF-I基因.将扩增的IGF-IcDNA用BamHI和EcoRI双酶切后,插入到同样双酶切处理的pGEX-1λT载体中,连接转化E.coliNM522,筛选克隆,酶切鉴定后,进行了核苷酸序列分析及表达.结果将IPTG诱导表达的菌体离心收集,经SDS-PAGE分析,在相对分子质量34000处可见明显高表达带,表达量可占菌体蛋白总量的20%以上.免疫印迹表明重组蛋白具有IGF-I的抗原性.结论重组人IGF-I的成功克隆与表达,将为进一步研究人IGF-I的生物学特性打下基础.